氧化苦參堿靶向納米脂質(zhì)體對大鼠肝纖維化的干預研究.pdf

1、目的：肝星狀細胞（HSC）的活化是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的中心事件，同時伴隨著其表面整合素等受體的上調(diào)，干預這類受體的作用可以實現(xiàn)靶向改變HSC的功能。我們根據(jù)前期研究中以人工合成RGD環(huán)肽（cyclic Arg-Gly-Asp-Tyr-Lys，cRGD）作為修飾配體，制備氧化苦參堿納米脂質(zhì)體（cRGD-NL-OM），并且以體外實驗證實其靶向結(jié)合HSC-T6，抑制其增值、活化及膠原成分分泌的結(jié)果，在本研究中以四氯化碳（CCL4）誘導大鼠肝纖維

2、化模型，進一步考察cRGD-NL-OM在體內(nèi)對HSC的干預作用。
　　 方法：⑴采用硫酸銨梯度法結(jié)合擠壓過膜法制備包封OM的納米脂質(zhì)體，RGD環(huán)肽通過二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺（DSPE-PEG3400-MAL）與納米脂質(zhì)體相連，構(gòu)建cRGD-NL-OM，并進行質(zhì)量評定；⑵將50只SD大鼠分為6組：正常組、對照組（CCL4）、NL干預（CCL4+NL）組、OM干預（CCL4+OM）組、NL-OM干預（CCL4+N

3、L-OM）組和cRGD-NL-OM干預（CCL4+cRGD-NL-OM）組；cRGD-NL-OM等（按OM 2 mg/kg折算，每周2次）干預組于CCL4皮下注射4周后給藥；連續(xù)實驗8周后處死動物取采集血清和肝組織等標本，進行病理學組織學評定，轉(zhuǎn)氨酶、膠原代謝成分如透明質(zhì)酸（HA）、層粘蛋白（LN）和Ⅳ型膠原（CⅣ）等檢測，同時以熒光實時定量PCR檢測I型膠原α2鏈（COL1A2）和轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）mRNA水平，利用We

4、stern免疫印記檢測α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）表達。
　　 結(jié)果：①制備的cRGD-NL-OM混懸液，平均粒徑88.2 nm，分布均一性好，Zeta電位為-61.73 mV；藥物的包封率為40.1％；②與對照組相比較，cRGD-NL-OM干預組和NL-OM干預組大鼠肝臟病理組織學評分顯著降低；而且也低于NL干預組及OM干預組；③cRGD-NL-OM干預組血清轉(zhuǎn)氨酶等肝損傷指標顯著低于對照組和其它各組；④與對照組、NL干預

5、組及OM干預組相比較，cRGD-NL-OM干預組 HA、LN和CⅣ等膠原成分的測定值顯著減低；⑤COL1A2 、TGF-β1 mRNA水平及α-SMA表達等檢測結(jié)果表明，cRGD-NL-OM干預組不僅顯著低于對照組、OM干預組和NL干預組，而且也顯著低于NL-OM干預組。
　　 結(jié)論：⑴研制的新型靶向載藥系統(tǒng)cRGD-NL-OM，粒徑均一，穩(wěn)定性好，符合實驗標準；⑵體內(nèi)研究顯示，cRGD-NL-OM干預后，實驗性肝纖維化組織學積