乳糖脂修飾苦參堿脂質(zhì)體的肝靶向性和體外抑瘤作用研究.pdf

1、苦參堿（Matrine）是中藥苦參、山豆根、苦豆子的主要活性成分，具有抗炎、抗心律失常、抗動(dòng)脈粥樣硬化、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒等多種藥理作用。特別是在治療病毒性肝炎方面取得了良好療效，臨床結(jié)果顯示對(duì)慢性乙型肝炎，肝纖維化等具有良好的治療效果。但臨床常用的苦參堿制劑在體內(nèi)吸收分布廣泛，半衰期短，到達(dá)肝臟的藥物濃度低，有一定副作用的缺點(diǎn)。制備苦參堿的肝臟靶向制劑，可減少藥物不良反應(yīng)，提高藥物濃度，增強(qiáng)療效，是目前苦參堿臨床應(yīng)用研究中的熱點(diǎn)課題。

2、 脂質(zhì)體（Liposome）是一種良好的藥物載體，具有緩釋作用、降低藥物毒性、保護(hù)藥物免受酶的降解等優(yōu)點(diǎn)，未經(jīng)修飾的脂質(zhì)體進(jìn)入人體內(nèi)主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，而在肝、脾、肺、骨髓等組織器官中蓄積，有一定的系統(tǒng)靶向性，但器官靶向性差。為進(jìn)一步提高肝靶向性，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞膜上存在能夠?qū)Ｒ恍宰R(shí)別含有半乳糖基或乳糖基化合物的去唾液糖蛋白受體（Asialoglycoprotein receptor，ASGP-R），合成了乳糖酰磷脂酰乙醇

3、胺（Lactosylphospha-tidylethanolamine，Lac-PE）修飾苦參堿脂質(zhì)體，期望通過(guò)Lac-PE與ASGP-R特異性結(jié)合使載藥脂質(zhì)體具有主動(dòng)肝靶向效果，為靶向治療肝臟疾病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 本文采用逆向蒸發(fā)法制備苦參堿脂質(zhì)體，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)，篩選出制備苦參堿脂質(zhì)體的最佳處方為：藥脂比1：10，磷脂-膽固醇比例4：1，外水相pH值為6.8，孵育溫度為60℃。以最佳處方制備的脂質(zhì)體平均包封率為48.1％。

4、 采用高效液相色譜法測(cè)定了脂質(zhì)體制劑中苦參堿的含量和脂質(zhì)體的包封率，以及小鼠組織勻漿中的苦參堿的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，方法靈敏度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可滿(mǎn)足分析的要求。用透射電鏡觀(guān)察脂質(zhì)體呈完整的小單室結(jié)構(gòu)，粒徑范圍為80～150 nm左右。將脂質(zhì)體分別在4℃和25℃下密閉放置1個(gè)月，以包封率、過(guò)氧化值為指標(biāo)考察其穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，脂質(zhì)體于4℃貯存時(shí)，以上指標(biāo)無(wú)顯著變化，脂質(zhì)體比較穩(wěn)定。脂質(zhì)體的體外釋藥實(shí)驗(yàn)表明苦參堿經(jīng)脂質(zhì)體包裹后具有一定的緩釋

5、效果。 本文研究了乳糖脂苦參堿脂質(zhì)體、苦參堿脂質(zhì)體和苦參堿溶液在小鼠體內(nèi)的組織分布。小鼠體內(nèi)組織分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與苦參堿溶液相比，普通苦參堿脂質(zhì)體及乳糖脂苦參堿脂質(zhì)體的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間明顯延長(zhǎng)，且乳糖脂苦參堿脂質(zhì)體的肝臟藥-時(shí)曲線(xiàn)下面積（Area under curve，AUC）值相對(duì)于苦參堿脂質(zhì)體和苦參堿溶液具有顯著性差異（p<0.05）。LML組中的肝臟相對(duì)于其它臟器的靶向效率（Targeting efficiency，Te）

6、值均大于1，是脾臟的2.7倍，是肺臟的3倍，是腎臟的6.6倍，是心臟的8.5倍，具有顯著性差異，提高了藥物靶向性的效果。 本文在上述基礎(chǔ)上，進(jìn)行了體外細(xì)胞學(xué)研究，通過(guò)MTT法檢測(cè)LML對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2的體外抑制作用，以人卵巢癌細(xì)胞系Skov3作對(duì)照，對(duì)比了乳糖脂苦參堿脂質(zhì)體，苦參堿脂質(zhì)體，游離苦參堿藥物體外對(duì)兩種癌細(xì)胞的抑制作用。體外試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著苦參堿濃度的升高，抑制率亦隨之升高，在0.5 mg/ml時(shí)，LML殺傷