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1、目的:確定大黃藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),對(duì)大黃多糖提取、純化工藝進(jìn)行研究,并將其制備成脂質(zhì)體,對(duì)其脂質(zhì)體制備進(jìn)行考察,篩選最合理工藝,使大黃多糖藥理作用與脂質(zhì)體技術(shù)結(jié)合,充分發(fā)揮藥效,并對(duì)大黃多糖及其脂質(zhì)體調(diào)節(jié)免疫力,抗腫瘤的作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
方法:采用單因素試驗(yàn)法對(duì)影響大黃多糖提取的溫度、固液比、提取時(shí)間、提取次數(shù)、醇沉濃度、醇用量等因素進(jìn)行考察,確定大黃多糖提取最佳工藝;采用HPD-300大孔樹脂對(duì)大黃多糖進(jìn)行脫色試驗(yàn)研究;采用
2、Sevage法除蛋白,用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量,對(duì)三氯甲烷與正丁醇比例、藥液與試劑的用量比例、萃取次數(shù)三個(gè)因素進(jìn)行單因素考察,以優(yōu)選除蛋白工藝;對(duì)大黃多糖脂質(zhì)體制備方法及影響脂質(zhì)體包封、成型因素進(jìn)行研究,以包封率為指標(biāo),篩選出適宜的大黃多糖脂質(zhì)體制備工藝;對(duì)大黃多糖及其脂質(zhì)體對(duì)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的影響進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,考察大黃多糖及其脂質(zhì)體對(duì)腸癌細(xì)胞HT29的體外作用,以驗(yàn)證大黃多糖抗腫瘤效果,證明其制劑的藥學(xué)作用及使用意義。
3、r> 結(jié)果:大黃多糖最佳提取工藝為:100℃下,10倍量水提2次,每次2h,用6倍量90%乙醇進(jìn)行粗多糖分離;大黃多糖脫色素最佳工藝為:0.25g/ml生藥藥液,以6BV/h速度滴漏,HPD-300大孔樹脂徑高比為1/17;最佳除蛋白工藝為:三氯甲烷與正丁醇體積比為3:1,藥液與Sevage試劑體積比為4:1,萃取分離次數(shù)為5次;采用注入法制備大黃多糖脂質(zhì)體,優(yōu)選工藝為膽固醇與卵磷脂質(zhì)量比為4:1,加入PH6.86磷酸鹽緩沖液40
4、ml,5.6mg/g大黃多糖液10ml;藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示,大黃多糖及其脂質(zhì)體能明顯提高巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)、吞噬系數(shù)(P<0.05);體外腫瘤細(xì)胞抑制實(shí)驗(yàn)顯示,大黃多糖及脂質(zhì)體對(duì)HT-29人腸癌細(xì)胞具有明顯的抑制作用(P<0.05)。
結(jié)論:大黃藥材資源豐富,來源廣泛,其多糖成分具有良好的調(diào)節(jié)免疫功能、抑制腫瘤細(xì)胞的作用。我們將大黃多糖制備成脂質(zhì)體,使其藥效得到充分發(fā)揮;試驗(yàn)結(jié)果顯示,大黃多糖提取純化工藝、脂質(zhì)體制備工藝設(shè)計(jì)合理
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