苦參堿對家蠶的毒害作用研究.pdf

1、在蠶區(qū)農(nóng)林害蟲防控過程中，苦參堿類農(nóng)藥可以通過多種途徑引起家蠶中毒。本文以非靶標(biāo)生物家蠶（Bombyx mori Linnaeus）現(xiàn)行主要品種871×872為試驗材料，運(yùn)用生測方法評價了苦參堿（純品）對家蠶的毒害性和安全性，詳細(xì)測試了家蠶在低劑量苦參堿處理后的消化利用、生長發(fā)育、吐絲結(jié)繭等過程的生理指標(biāo)，系統(tǒng)深入地檢測了低劑量苦參堿對家蠶血清中營養(yǎng)物質(zhì)、保護(hù)酶系統(tǒng)的影響，同時采用比色法或熒光探針法探索了在后部絲腺、中腸和脂肪體組織中解

2、毒酶、乙酰膽堿酯酶、活性氧、脂質(zhì)過氧化物等生化指標(biāo)的變化規(guī)律，還運(yùn)用堿性單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)，對家蠶在低劑量苦參堿處理后其血細(xì)胞DNA的損傷情況進(jìn)行了初步探討，以期為進(jìn)一步開展低劑量農(nóng)藥對家蠶的慢性毒害、遺傳毒性以及家蠶抗性應(yīng)對機(jī)制等方面的研究提供參考。
　　本研究得出以下主要結(jié)果。
　　(1)家蠶苦參堿中毒癥狀及其毒力。家蠶苦參堿急性中毒后癥狀為頭胸略舉、胸部膨大、尾部縮小，繼而痙攣，身體扭曲呈“S”形;亂爬、肢足無力、在葉

3、面上常翻滾仰臥，臨死前口吐腸液，但無脫肛現(xiàn)象，尸體縮小1/3～2/3。慢性中毒常常導(dǎo)致不能就眠，眠起和發(fā)育不齊，齡期延長，死籠率高，經(jīng)濟(jì)性狀差，世代完成度低?？鄥A對家蠶熏蒸毒性較低，安全間隔期約35天。急性毒力測試結(jié)果顯示，苦參堿對家蠶3、4、5齡幼蟲的半致死濃度分別為12μg/L、70μg/L和660μg/L，其按家蠶毒性等級四級分類標(biāo)準(zhǔn)分屬高、中和低毒性，風(fēng)險等級評價結(jié)果屬高風(fēng)險。
　　(2)低劑量苦參堿對家蠶生長發(fā)育和經(jīng)濟(jì)

4、性狀的影響。4齡家蠶開始添食4.49μg/L、8.77μg/L、17.54μg/L和35.08μg/L的苦參堿后，家蠶體重相比于對照組均出現(xiàn)先抑制后增長趨勢，增長發(fā)生在5齡第3天;家蠶體重增長受影響程度較高，其在觀察期內(nèi)呈負(fù)值的天數(shù)顯著增多;生長率在4齡期內(nèi)顯著降低，5齡期不顯著;飼喂桑葉量一定量下，苦參堿處理后家蠶取食量差異不顯著，而相對取食量卻顯著增加;各處理組近似消化率差異不顯著，結(jié)果在60％～80％間變動;因食物消化和排糞量在苦

5、參堿處理后出現(xiàn)紊亂，食物利用率在4齡期呈負(fù)值的天數(shù)顯著增多;食物轉(zhuǎn)化率在4齡期呈抑制狀態(tài)，在5齡期有上升趨勢，高濃度組達(dá)到顯著水平。4齡和5齡的齡期經(jīng)過均出現(xiàn)延長，17.54μg/L和35.08μg/L劑量組的齡期延長達(dá)到極顯著水平，生長發(fā)育受到明顯影響。家蠶的經(jīng)濟(jì)性狀如繭層量、全繭量、繭層率、好繭率等指標(biāo)均出現(xiàn)下降，較高劑量組達(dá)到極顯著水平;死籠率在苦參堿處理后顯著提高，繭殼最長直徑、蟲蛹長度、蟲蛹飽滿度下降。
　　(3)低劑量

6、苦參堿對家蠶生理生化的影響。5齡家蠶添食41μg/L、83μg/L、165μg/L和330μg/L的苦參堿后，其血液中蛋白、血糖（總糖、海藻糖）和膽固醇等營養(yǎng)物質(zhì)的含量受到影響，蛋白含量呈先增長后下降趨勢，血糖含量呈持續(xù)上升趨勢，而膽固醇含量則出現(xiàn)下降趨勢，且隨苦參堿添食劑量的增加而變化增強(qiáng)。血清保護(hù)酶系統(tǒng)在苦參堿處理后受影響程度顯著，SOD、CAT和POD活性均出現(xiàn)先抑制后激活的變化趨勢。家蠶體內(nèi)解毒酶活性變化顯著，其中GST在后部絲

7、腺、脂肪體和中腸中均呈先抑制后激活趨勢，脂肪體組織GST受苦參堿影響程度最強(qiáng);而CarE在后部絲腺和中腸中呈持續(xù)抑制狀態(tài)，在脂肪體組織中呈先抑制后激活規(guī)律，中腸組織CarE受苦參堿影響程度最強(qiáng)。家蠶體內(nèi)AChE活性受影響程度極顯著，各組織內(nèi)AChE活性在苦參堿處理后均受到強(qiáng)烈抑制，且隨時間延長也不能恢復(fù)，以脂肪體AChE受苦參堿影響程度最大。一定劑量苦參堿處理可導(dǎo)致氧化猝發(fā)，家蠶各組織線粒體ROS水平出現(xiàn)激活，較低劑量(41μg/L)時

8、與對照組差異不顯著，在較高劑量（165μg/L～330μg/L）下ROS激活達(dá)到極顯著程度，最大值出現(xiàn)在苦參堿處理后第2天，以中腸組織ROS含量最高。各組織MDA含量在苦參堿處理后出現(xiàn)激活，其劑量-效應(yīng)關(guān)系類似于ROS，以后部絲腺MDA積累最高。MDA含量的上升正是ROS積累造成的結(jié)果。
　　(4)苦參堿對家蠶的遺傳毒性。采用單細(xì)胞凝膠電泳法，檢測了苦參堿處理后5齡家蠶血細(xì)胞DNA損傷情況，彗星尾部DNA含量、尾長、尾距、Oliv