苦參堿防治后囊膜混濁的基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：研究苦參堿(Matrine，Mat)對體外培養(yǎng)的兔晶狀體上皮細(xì)胞(rabbitlensepithelialcells，RLECs)增殖和凋亡的影響，為后囊膜混濁(PosteriorCapsularOpacification，PCO)的藥物防治提供新的思路和理論依據(jù)。 方法：取RLECs進(jìn)行原代培養(yǎng)。第三代RLECs培養(yǎng)24h后，分別加入不同濃度的Mat(試驗(yàn)組)和同體積的PBS液(對照組)作用不同的時(shí)間，采用MTT比色法觀

2、察Mat對RLECs增殖的影響；然后，取第三代RLECs分別加入不同濃度(0.5、1.0、2.0mg/ml)的Mat(試驗(yàn)組)、0.02mg/ml的MMC(陽性對照組)和PBS液(陰性對照組)處理不同的時(shí)間(6、12、24h)，利用流式細(xì)胞儀(Flowcytometer，F(xiàn)CM)檢測Mat和MMC對RLECs凋亡的影響。 結(jié)果：MTT比色法測定結(jié)果顯示，用0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mg

3、/ml的Mat處理RLECs24h后，細(xì)胞增殖抑制率分別為5.72％、12.50％、19.43％、25.94％、34.37％、42.49％、54.56％、62.93％、70.39％。各試驗(yàn)組與對照組相比均具有顯著性差異(P＜0.05)，各試驗(yàn)組之間兩兩比較也具有顯著性差異(P＜0.05)。隨著濃度的增高，Mat抑制細(xì)胞增殖的作用越明顯，當(dāng)濃度達(dá)到1.2mg/ml時(shí)，細(xì)胞抑制率超過了50％。我們再采用高(1.5mg/ml)、中(1.0mg

4、/ml)、低(0.5mg/ml)三種Mat濃度觀察作用不同時(shí)間(12、24、36、48、72h)對體外培養(yǎng)的RLECs的影響。結(jié)果顯示，經(jīng)0.5mg/ml的Mat處理RLECs12、24、36、48、72h后，細(xì)胞增殖抑制率分別為11.64％、20.47％、35.42％、45.82％、52.04％；經(jīng)1.0mg/ml的Mat處理后分別為27.37％、41.01％、49.99％、63.26％、70.80％；而經(jīng)1.5mg/ml的Mat處理

5、后分別為46.98％、64.36％、73.09％、81.64％、89.32％。各試驗(yàn)組與對照組相比均具有顯著性差異(P＜0.05)；當(dāng)濃度相同時(shí)，隨著時(shí)間的延長各試驗(yàn)組之間兩兩比較也有顯著性差異(P＜0.05)。濃度越大，作用時(shí)間越長，Mat的抑制增殖作用越明顯；通過流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示PBS液組作用6、12、24h后，凋亡率(％)為0.6417±0.1134、0.6783±0.1174、0.6867±0.0864；Mat0.5mg/

6、ml濃度組凋亡率(％)分別為3.4333±0.4926、4.8167±0.5419、6.4833±0.5707；Mat1.0mg/ml濃度組凋亡率(％)分別為5.4667±0.8824、6.7267±0.9695、8.5667±0.7763；Mat2.0mg/ml濃度組凋亡率分別為7.1667±1.1431、9.0833±0.7441、12.2167±0.8886；MMC0.02mg/ml濃度組凋亡率分別為11.2833±0.6338、

7、17.1333±0.9070、24.4500±1.2677。PBS液處理組隨作用時(shí)間延長凋亡率無顯著性的差異(P＞0.05)，不同濃度的Mat及0.02mg/ml的MMC作用不同時(shí)間后誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡與PBS液組比較均有顯著性的差異(P＜0.05)，相同的處理時(shí)間內(nèi)，各處理因素及水平間的凋亡率也均有顯著性差異(P＜0.05)。隨著濃度的增加和時(shí)間的延長，Mat誘導(dǎo)RLECs凋亡的作用越明顯。 結(jié)論：Mat能有效地抑制體外培養(yǎng)的RLE