用于防治后囊混濁的晶狀體囊袋長效植入劑的設(shè)計(jì)與評價(jià).pdf

1、白內(nèi)障囊外摘除術(shù)后極易發(fā)生后囊混濁(Posterior capsule opacification(PCO))，導(dǎo)致患者再次失明。成人術(shù)后0.5～5年發(fā)生率可達(dá)50％，PCO在兒科白內(nèi)障手術(shù)中尤為嚴(yán)重，發(fā)病率幾乎達(dá)100％。治療PCO常用的是Nd：YAG激光切開術(shù)，但再次進(jìn)行手術(shù)不僅增加患者的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)，并可能發(fā)生更嚴(yán)重的并發(fā)癥。而由于兒童囊膜十分密集，無法使用激光手術(shù)治療。因此，非手術(shù)方法的PCO防治研究極具臨床意義。由于藥物防治

2、具有廉價(jià)、方便、病人易接受等特點(diǎn)，因此，進(jìn)行藥物防治PCO的研究尤為重要。這正是提出本課題的初衷。 本研究以體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞(Human lens epithelium cells．HLECs)為藥物評價(jià)和篩選模型，篩選HLECs的強(qiáng)抑制劑。并用篩選出的藥物為模型藥物，以甲基丙烯酸甲酯(MMA)和甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)交聯(lián)共聚物(p(HEMA-co-MMA))為載體設(shè)計(jì)并制備長效緩釋植入劑。該制劑于行白內(nèi)障手術(shù)時(shí)植

3、入眼內(nèi)，發(fā)揮抑制LECs生長、防治PCO的作用。 以HLECs為藥物篩選模型，尋找有效的HLECs增殖抑制劑，并首次發(fā)現(xiàn)多西他賽、鹽酸吡柔比星和鹽酸表柔比星對HLECs生長的顯著抑制作用，于72h三者的IC50分別為20.4nM，65.3nM和94.0nM，其中以多西他賽的IC50為最小。而影響核酸生物合成的藥物雷替曲塞在23.22μM-523.56μM的濃度范圍內(nèi)對HLECs的生長無明顯的抑制作用。采用流式細(xì)胞術(shù)、Annexi

4、n v-FITC/PI標(biāo)記法和蛋白印跡分析初步研究了多西他賽抑制HLECs增殖的機(jī)理，HLECs經(jīng)8.3nM和266nM的多西他賽處理48h后，G2/M期百分率由對照組的5.44±1.10％分別增加到72.5±1.56％(p<0.01)和88.0±1.93％(p<0.01)；早期凋亡率由對照組的3.1％上升至22.4％(p<0.01)和27.9％(p<0.01)；并減少bcl-2蛋白的表達(dá)。說明多西他賽是HLECs的強(qiáng)抑制劑，可將其阻滯

5、在G2/M期，誘導(dǎo)其早期凋亡，這可能是通過抑制bcl-2蛋白的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。以多西他賽為模型藥物，根據(jù)眼內(nèi)的特殊結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)并制備符合臨床實(shí)際用藥的晶狀體囊袋內(nèi)植入劑。將藥物與聚合物的單體(HEMA、MMA)、交聯(lián)劑(EGDMA)、啟動物(AIBN)混合，使藥物溶于單體混合物，倒入模具中，加熱聚合制備多西他賽眼內(nèi)植入劑，并以藥物釋放速率為指標(biāo)評價(jià)影響藥物釋放因素和藥物釋放機(jī)制。結(jié)果表明，制劑中藥物的釋放更符合Higuchi模型；且釋藥速率

6、常數(shù)k與MMA/HEMA比值(R)呈良好的線性關(guān)系(k=-0.4457R+0.1976，r2=0.9452，p<0.01)，二者呈負(fù)相關(guān)，即隨MMA比例的增加釋藥速率減慢；k與EGDMA用量(W)呈良好線性關(guān)系(K=-0.5225 W+0.1462，r2=0.8640，p<0.01)，二者呈負(fù)相關(guān)，即隨處方中EGDMA用量的增加釋藥速率減慢。根據(jù)所得k與R、W間的相關(guān)方程可設(shè)計(jì)相應(yīng)釋藥速率的制劑。 對所制備的p(HEMA-co-

7、MMA)和植入劑分別采用紅外光譜(FT-IR)、X-射線衍射(X-RD)、掃描電鏡(SEM)進(jìn)行表征。IR結(jié)果表明藥物與載體分子間僅存在氫鍵作用，沒有化學(xué)鍵合，活性保持完好。X-RD結(jié)果顯示多西他賽在材料中以無定形狀態(tài)存在。 對所制備的載體材料p(HEMA-co-MMA)，依據(jù)GB/T 1 6886醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和要求進(jìn)行生物相容性考察。以小鼠成纖維細(xì)胞(L-929)模型考察p(HEMA-co-MMA)一個(gè)月浸提液的體外