苦參堿對(duì)STAT3及腫瘤相關(guān)代謝酶作用的研究.pdf

1、目的：本研究旨在從信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和代謝酶兩方面揭示苦參堿的抗腫瘤機(jī)制，并初步討論兩者之間的相關(guān)性。STAT3經(jīng)證實(shí)是與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子，其在90％的腫瘤細(xì)胞中都表現(xiàn)為異常增高。它的激活能夠?qū)е孪掠蔚陌┗蛉鏲-myc，BCL-<,XL>等表達(dá)增加，從而導(dǎo)致細(xì)胞癌變。本文對(duì)苦參堿能否抑制STAT3表達(dá)及功能作了研究。而STAT3經(jīng)過(guò)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控系統(tǒng)和藥物代謝酶的表達(dá)存在關(guān)聯(lián)，本文研究了苦參堿對(duì)與腫瘤相關(guān)的藥物代謝酶CYP1A

2、1，CYP2D6，CYP2E1，CYP3A4，UGT1A1，UGT2B，UGT284的表達(dá)的影響。并對(duì)苦參堿對(duì)表達(dá)最多的代謝酶CYP3A4的活性影響進(jìn)行探討。并且初步探討這些酶的表達(dá)與STAT3的關(guān)系。 方法：培養(yǎng)HepG2細(xì)胞，使用0，0.125，0.25，0.5，1，2mM苦參堿，平行使用0， 6.25，12.5，25，50，100ng/ml IL-6，觀察藥物作用后24h和48h后HepG2細(xì)胞中STAT3的mRNA和蛋白

3、表達(dá)，藥物作用后12h和24h P-STAT3的蛋白表達(dá)。觀察HepG2細(xì)胞中CYP1A1，CYP2D6，CYP2E1，CYP3A4，UGT1A1，UGT2B，UGT284的表達(dá)，CYP3A4的蛋白表達(dá)及活性。mRNA表達(dá)使用半定量PCR檢測(cè)，測(cè)蛋白表達(dá)使用western-blot。使用咪噠唑侖做探藥，MS-HPLC檢測(cè)咪噠唑侖及其代謝產(chǎn)物1-OH咪噠唑侖，考察CYP3A4的活性。 結(jié)果：苦參堿作用后48h能夠顯著抑制STAT3

4、的表達(dá)，2mM苦參堿使mRNA降低30％(P=0.001)，蛋白表達(dá)降低50％(P=0.016)。而苦參堿對(duì)STAT3的激活也有抑制效果，P-STAT3的表達(dá)在12h就抑制了70％(P=0.001)，不過(guò)在24h回落至50％左右(P=0.042)。苦參堿對(duì)CYP2E1，UGT1A1，UGT2B的表達(dá)都有誘導(dǎo)作用。2mM作用后48h，CYP2E1的表達(dá)為空白的1.5倍。作用后24h，UGT1A1，UGT2B表達(dá)分別為空白的2和2.5倍(P

5、<0.01)。苦參堿對(duì)CYP3A4的mRNA抑制在48h達(dá)到60％，蛋白表達(dá)被抑制80％，而活性更是達(dá)到90％以上(P<0.01)。而IL-6對(duì)CYP2E1，UGT1A1，UGT2B的作用與苦參堿完全相反，可以抑制它們的表達(dá)達(dá)到70％左右。IL-6對(duì)CYP3A4也是抑制作用，抑制率達(dá)到80％。相關(guān)性分析表明，CYP2E1，UGT1A1，UGT2B與STAT3的表達(dá)相關(guān)系數(shù)(R<'2>)分別為0.77，0.38，0.43，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6、而與CYP3A4的表達(dá)和活性相關(guān)性不大(P>0.05)。 結(jié)論：苦參堿是一種能夠抑制STAT3表達(dá)及活性的抗腫瘤藥物。它能夠抑制CYP3A4，誘導(dǎo)UGT1A1，UGT2B的表達(dá)，說(shuō)明苦參堿能夠抑制某些前致癌物的激活，增強(qiáng)細(xì)胞的解毒能力，起到保護(hù)細(xì)胞的作用。STAT3的激活劑IL-6對(duì)CYP2E1，UGT1A1，UGT2B的作用與苦參堿恰恰相反，相關(guān)性分析也表明這些酶的表達(dá)與STAT3的表達(dá)和激活顯著相關(guān)。但是對(duì)CYP3A4的調(diào)節(jié)