納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿抗癌作用研究.pdf

1、研究納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿在體外對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞、胃癌BGC-823細(xì)胞、結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞和膀胱癌EJ細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，建立荷瘤鼠模型研究納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿在體內(nèi)對(duì)肝腫瘤、胃腫瘤、結(jié)腸腫瘤、膀胱腫瘤的抑制作用，為進(jìn)一步開發(fā)納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿提供依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法： (1) 用MTT法研究市售羥基喜樹堿注射液(哈爾濱三聯(lián)制藥廠，批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20033506)和納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿在200ug/ml、

2、100ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、12.5ug/ml五個(gè)不同濃度下，對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞的抑制作用；在100ug/ml、．50ug/ml、25ug/ml、12.5ug/ml、6.25ug/ml五個(gè)不同濃度下，對(duì)胃癌BGC-893細(xì)胞、結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞和膀胱癌EJ細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。 (2) 建立裸鼠皮下移植瘤模型肝癌和胃癌模型：采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)法隨機(jī)分為空白組、市售羥基喜樹堿組(陽(yáng)性對(duì)照組)、納米脂質(zhì)體化羥基

3、喜樹堿高、中、低劑量組?？瞻捉M經(jīng)腹腔注射生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組腹腔注射市售羥基喜樹堿注射液2.5mg/kg，納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿高、中、低劑量組(分別為5.0mg/kg、2.5mg/kg、1.25mg/kg)腹腔注射，3次/周，共給藥12次。期間，每三天用游標(biāo)卡尺測(cè)量一次腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑，觀察裸鼠腫瘤生長(zhǎng)情況。給藥35天后處死動(dòng)物，取瘤組織稱重，計(jì)算抑瘤率。稱重后，用10﹪甲醛溶液固定作病理檢查，采用蘇木精.伊紅(HE)染色法觀察腫瘤組

4、織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)變化。結(jié)腸癌和膀胱癌模型：采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)法隨機(jī)分為空白組、陽(yáng)性對(duì)照組、納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿組，空白組經(jīng)腹腔注射生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組腹腔注射市售羥基喜樹堿注射液2.5mg/kg,，納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿組腹腔注射納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿2.5mg/kg，給藥方式為隔天給藥，共給藥7次。期間，每?jī)商鞙y(cè)量一次腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑，觀察裸鼠腫瘤生長(zhǎng)情況，給藥15天后處死動(dòng)物，取瘤組織稱重，計(jì)算抑瘤率。稱重后，用10﹪甲醛溶液固定作

5、病理檢查，采用蘇木精-伊紅(HE)染色法觀察腫瘤組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明： (1)市售羥基喜樹堿注射液和納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用，并且抑制率隨時(shí)間和劑量的增加而增加。濃度為50ug/ml時(shí)，作用時(shí)間為24h、48h后，市售羥基喜樹堿對(duì)HepG-2細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率為36.28﹪，68.21﹪；納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿為56.92﹪，83.43﹪。市

6、售羥基喜樹堿和納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞的IC50值隨作用時(shí)間增加而減少，48h分別為2.43ug/ml，0.23ug/ml。 (2)市售羥基喜樹堿和納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用，并且抑制率隨時(shí)間和劑量的增加而增加。濃度為50ug/ml時(shí)，作用時(shí)間為24h、48h后，市售羥基喜樹堿對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率為36.90﹪，71.43﹪；納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿為2

7、9.52﹪，61.47﹪。市售羥基喜樹堿和納米脂質(zhì)體的羥基喜樹堿對(duì)胃癌BGC-823細(xì)胞的IC50值隨作用時(shí)間增加而減少，48h分別為7.94 ug/ml和0.12 ug/ml。 (3)市售羥基喜樹堿和納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿對(duì)結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞的生長(zhǎng)有一定的抑制作用，并且抑制率隨時(shí)間增加而增加。濃度為50ug/ml時(shí)，作用時(shí)間為24h、48h后，市售羥基喜樹堿對(duì)結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞的生長(zhǎng)的抑制率為37.91﹪，58.86﹪；納米脂

8、質(zhì)體化羥基喜樹堿為15.06﹪，36.53﹪。 (4)市售羥基喜樹堿和納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿對(duì)膀胱癌EJ細(xì)胞的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用，并且抑制率隨時(shí)間和劑量的增加而增加。濃度為50ug/ml時(shí)，作用時(shí)間為24h、48h后，市售羥基喜樹堿對(duì)膀胱癌EJ細(xì)胞的抑制率為39.13﹪，78.85﹪；納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿為38.38﹪，73.79﹪。 2.裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)表明： (1)市售羥基喜樹堿劑量為2.5mg

9、/kg時(shí)，對(duì)裸鼠肝移植瘤的抑瘤率為23.49﹪，納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿高、中、低劑量(5.0mg/kg、2.5mg/kg、1.25mg/kg)時(shí)，對(duì)裸鼠肝移植瘤的抑瘤率分別為55.43﹪，41.44﹪，16.39﹪。 (2)市售羥基喜樹堿劑量為2.5mg/kg時(shí)，對(duì)裸鼠胃移植瘤的抑瘤率為23.10﹪，納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿高、中、低劑量(5.0 mg/kg，2.5mg/kg，1.25mg/kg)時(shí)，對(duì)裸鼠胃移植瘤的抑瘤率分別為8

10、3.93﹪，36.06﹪，23.22﹪。 (3)市售羥基喜樹堿和納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿劑量為2.5 mg/kg時(shí)，對(duì)裸鼠結(jié)腸移植瘤的抑瘤率分別為49.71﹪和54.75﹪。(4)市售羥基喜樹堿和納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿劑量為2.5 mg/kg時(shí)，對(duì)裸鼠膀胱移植瘤的抑瘤率分別為39.92﹪和54.24﹪。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論： 1.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，市售羥基喜樹堿和納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞、胃癌BGC-8

11、23細(xì)胞、結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞和膀胱癌EJ細(xì)胞均具有直接的抑制作用，并呈現(xiàn)顯著的時(shí)間依賴性和一定的劑量依賴性。納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿對(duì)肝癌ItepG-2細(xì)胞、胃癌BGC-823細(xì)胞、結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞和膀胱癌EJ細(xì)胞的抑制率隨著劑量的降低較市售羥基喜樹堿不明顯。 2．裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，市售羥基喜樹堿和納米脂質(zhì)體化羥基喜樹堿對(duì)裸鼠肝、胃、結(jié)腸、和膀胱癌移植瘤均具有一定的抑制作用，其作用機(jī)制可能與直接抑制腫瘤生長(zhǎng)有關(guān)。且抑制效果