羥基喜樹(shù)堿脂質(zhì)體預(yù)防脊柱術(shù)后瘢痕組織粘連的研究.pdf

1、在脊柱手術(shù)后，持續(xù)的或再次復(fù)發(fā)的疼痛或神經(jīng)功能障礙經(jīng)常出現(xiàn)，病因有硬膜外瘢痕的粘連、椎管狹窄、脊椎穩(wěn)定性被破壞等，硬膜外的瘢痕粘連可能是其中最主要的原因，機(jī)制主要與成纖維細(xì)胞的增殖和硬膜外炎癥反應(yīng)相關(guān)。瘢痕的粘連收縮會(huì)牽拉硬膜和神經(jīng)根，使硬膜和神經(jīng)根活動(dòng)受限，被包繞的神經(jīng)根受到牽拉和壓迫，神經(jīng)纖維的軸漿運(yùn)輸、動(dòng)靜脈血運(yùn)到受影響，會(huì)產(chǎn)生以下腰部疼痛、下肢麻木無(wú)力等為表現(xiàn)的臨床并發(fā)癥狀。因此，通過(guò)何種有效手段來(lái)預(yù)防脊柱術(shù)后硬膜外瘢痕粘連是當(dāng)

2、前困擾國(guó)內(nèi)外醫(yī)生的一個(gè)重要難題。
　　 腰椎術(shù)后下腰痛反復(fù)發(fā)作以及殘留的坐骨神經(jīng)痛癥狀是腰椎手術(shù)的一大難題。在腰椎手術(shù)失敗綜合征(Failed backsurgery syndrome，F(xiàn)BSS)的病例中，約有5％是由于手術(shù)因素引起，這類(lèi)病人在手術(shù)以后很難再正常的生活和工作。
　　 醫(yī)源性導(dǎo)致腰椎手術(shù)失敗的原因有很多：手術(shù)指征不明確，術(shù)中減壓不徹底，術(shù)中減壓面積太大損傷關(guān)節(jié)面導(dǎo)致脊柱結(jié)構(gòu)不穩(wěn)，手術(shù)節(jié)段選擇錯(cuò)誤，復(fù)發(fā)性椎間

3、盤(pán)突出，感染，慢性炎癥，減壓過(guò)程中損傷神經(jīng)根以及硬膜外纖維化。
　　 硬膜外纖維化是腰椎手術(shù)失敗因素中被最多提及的。越來(lái)越多的脊柱外科醫(yī)生意識(shí)到了它的重要性，也有一些醫(yī)生對(duì)它有所質(zhì)疑。回顧性研究已經(jīng)表明，硬膜外纖維化與腰椎術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生具有明確的相關(guān)性。然而，硬膜外纖維化引起脊柱術(shù)后疼痛機(jī)制的相關(guān)研究還非常少。其機(jī)制可能有前列腺素和白細(xì)胞介素產(chǎn)生的化學(xué)反應(yīng)，硬膜與神經(jīng)根活動(dòng)受限并且受到機(jī)械牽拉，還有硬膜和神經(jīng)根受到直接壓迫。

4、r>　　 硬膜外纖維化也給二次手術(shù)制造了很大困難。不僅因?yàn)榍宄：劢M織需要更長(zhǎng)的手術(shù)時(shí)間，還因?yàn)樾g(shù)后腦脊液漏、神經(jīng)根損傷、出血的可能性會(huì)明顯增高。
　　 目前，臨床上常用治療瘢痕組織增生的方法很多，大致可分為手術(shù)和非手術(shù)治療兩大類(lèi)。單純手術(shù)切除瘢痕疙瘩容易復(fù)發(fā)，運(yùn)用脂肪，皮片或皮瓣移植等改進(jìn)的手術(shù)方法，復(fù)發(fā)率仍舊很高，且有近半數(shù)的供區(qū)發(fā)生瘢痕疙瘩。非手術(shù)療法包括壓迫治療、放療、藥物治療以及冷凍療法等，其中藥物治療是重要手段之一

5、。治療瘢痕增生的藥物種類(lèi)繁多，已應(yīng)用于臨床的藥物主要包括抗增殖藥物、皮質(zhì)激素類(lèi)、免疫調(diào)節(jié)類(lèi)、抗代謝類(lèi)、抗過(guò)敏類(lèi)藥物、鈣通道阻滯劑、抗氧自由基類(lèi)、生物制劑類(lèi)、酶類(lèi)、中藥類(lèi)等。但由于各種藥物均有不同程度的副作用，藥物的可靠性不確定，均使其應(yīng)用受到了一定的限制。因此，一種無(wú)損傷，副作用小，同時(shí)抗瘢痕效果可靠的藥物必將能夠滿(mǎn)足臨床上抗粘連的迫切需要。
　　 抗代謝藥物(具有抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶的酶活性作用，該酶參與DNA的復(fù)制、修復(fù)、遺傳重組

6、和轉(zhuǎn)錄)目前是抑制瘢痕形成最為有效的藥物，羥喜樹(shù)堿(hydroxycamptothecin，HCPT)已經(jīng)被證實(shí)能夠抑制成纖維細(xì)胞增生、預(yù)防瘢痕組織形成粘連，但由于其毒性作用引起副反應(yīng)，其應(yīng)用受到一定限制。脂質(zhì)體(liposomes)作為一種被廣泛應(yīng)用的藥物載體，具有可生物降解、藥物包裹率高、免疫原性小等優(yōu)點(diǎn)，能夠通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞融合作用直接將藥物送入細(xì)胞內(nèi)，從而避免了使用高濃度游離藥物。脂質(zhì)體能通過(guò)改變藥物在生物體內(nèi)的分布，集中于病變組織

7、處釋放藥物以增強(qiáng)藥效，減少對(duì)正常組織的毒性和不良反應(yīng)。
　　 因此，我們?cè)O(shè)計(jì)將一直硬膜外粘連效果明顯的羥基喜樹(shù)堿與具有諸多優(yōu)勢(shì)的藥物載體脂質(zhì)體結(jié)合制成緩釋控制系統(tǒng)，一方面，由于羥基喜樹(shù)堿的存在，能夠有效抑制瘢痕組織的形成；另一方面，可以通過(guò)脂質(zhì)體搭載藥物，達(dá)到將羥基喜樹(shù)堿緩慢釋放至手術(shù)區(qū)域周?chē)?，從而延長(zhǎng)藥效時(shí)間，減少不良反應(yīng)的目的。
　　 目的
　　 設(shè)計(jì)制備一種性質(zhì)穩(wěn)定、質(zhì)量可靠的羥基喜樹(shù)堿脂質(zhì)體控制釋放系統(tǒng)(

8、liposome-hydroxycamptothecin，L-HCPT)，通過(guò)體外細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該系統(tǒng)能夠有效抗成纖維細(xì)胞增殖，并通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其在新西蘭兔椎板切除術(shù)后模型中能有效預(yù)防硬膜與周?chē)M織粘連；通過(guò)該實(shí)驗(yàn)探討預(yù)防脊柱術(shù)后瘢痕組織形成的機(jī)制。
　　 方法
　　 1、羥基喜樹(shù)堿脂質(zhì)體控釋系統(tǒng)的制備及檢驗(yàn)：將卵磷脂、膽固醇及羥基喜樹(shù)堿、純化水按比例配置，蒸汽滅菌，平鋪制膜后烘干。制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，驗(yàn)證其生物相容性。用

9、高效液相色譜儀將精密測(cè)量的樣品過(guò)柱，外標(biāo)法以峰面積計(jì)算羥基喜樹(shù)堿含量；
　　 2、建立成年新西蘭兔L5椎板切除動(dòng)物模型及大體觀察：對(duì)24只成年新西蘭兔進(jìn)行L5椎板切除術(shù)。將實(shí)驗(yàn)組兔子隨機(jī)分成3組。Ⅰ組于新西蘭兔硬膜后方以腦棉浸泡羥基喜樹(shù)堿溶液濕敷5分鐘后用生理鹽水徹底沖洗干凈；Ⅱ組于硬膜后方植入1ml羥基喜樹(shù)堿脂質(zhì)體膜；Ⅲ組以生理鹽水沖洗作空白對(duì)照組。術(shù)后28天，解剖手術(shù)節(jié)段，觀察并根據(jù)Basso，Beattie，and Bre

10、snahan(BBB)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估新西蘭兔后肢活動(dòng)狀況；對(duì)術(shù)后動(dòng)物手術(shù)節(jié)段進(jìn)行大體觀察其局部硬膜外粘連狀況給予實(shí)驗(yàn)新西蘭兔核磁共振檢查(MRI)；
　　 3、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)：術(shù)后4周處死動(dòng)物，；取手術(shù)部位0.2*0.2*0.5cm大小瘢痕組織，利用流式細(xì)胞儀測(cè)量成纖維細(xì)胞凋亡率；在分光光度計(jì)下測(cè)量瘢痕組織中羥脯氨酸的含量及做組織學(xué)觀察檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果
　　 我們所制備的羥基喜樹(shù)堿脂質(zhì)體，經(jīng)過(guò)動(dòng)物學(xué)及細(xì)胞組織學(xué)實(shí)驗(yàn)證

11、實(shí)濃度為2mg/ml時(shí)具有較好的理化性質(zhì)。新西蘭兔實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在進(jìn)行L5椎板切除術(shù)后均發(fā)現(xiàn)傷口愈合良好，無(wú)并發(fā)癥，無(wú)死亡。大體觀察發(fā)現(xiàn)，在應(yīng)用羥基喜樹(shù)堿脂質(zhì)體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組，硬膜與周?chē)M織無(wú)粘連，硬膜及神經(jīng)根活動(dòng)良好。核磁共振檢查示硬膜外無(wú)明顯瘢痕組織形成。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后肢活動(dòng)功能良好。羥基喜樹(shù)堿溶液的應(yīng)用也具有一定的抗粘連作用，但是單獨(dú)使用不如羥基喜樹(shù)堿脂質(zhì)體作用明顯。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)也顯示羥基喜樹(shù)堿脂質(zhì)體具有良好的促進(jìn)成纖維細(xì)胞凋亡作用。