Topo I在人病理性瘢痕組織中的表達及羥基喜樹堿對人病理性瘢痕成纖維細胞的作用.pdf

1、目的：病理性瘢痕的防治是醫(yī)學領域的重要課題，本研究通過比較病理性瘢痕與正常皮膚組織中DNA拓撲異構酶I(Topo I)是否存在差異，探討Topo I特異性抑制劑羥基喜樹堿(hydroxycamptothecin,HCPT)對人病理性瘢痕成纖維細胞增殖的影響，細胞周期的影響及其對細胞凋亡的誘導作用，以期了解HCPT對成纖維細胞的藥理作用。 方法：(1)手術切除的病理性瘢痕組織標本21例(年齡18～40歲：男性15例，女性6例；病程

2、在燒傷創(chuàng)面愈合后6～9個月，在此期間沒有接受過針對瘢痕的各種治療)：同一病人多余的正常皮膚組織標本21例作為對照組；采用免疫組化的方法檢測拓撲異構酶I的表達。(2)體外培養(yǎng)人病理性瘢痕成纖維細胞。1)選取羥基喜樹堿2～1000ng/ml共10個藥物梯度，分別選取24小時，48小時，72小時3個時間段，采用MTT法檢測羥基喜樹堿對成纖維細胞生長的抑制作用。2)采用流式細胞儀定量檢測羥基喜樹堿5個藥物濃度(31，63，125，250，500

3、ng/ml)處理24h后成纖維細胞細胞周期的改變及凋亡的百分率。3)500ng/ml濃度的羥基喜樹堿干預24小時后采用DNA片段化分析方法研究其對病理性瘢痕成纖維細胞凋亡的誘導作用。 結果：(1)TopoI在人病理性瘢痕和正常皮膚組織的角質形成細胞，成纖維細胞中均有表達。正常皮膚中，角質形成細胞及成纖維細胞各有3例免疫組化陽性；病理性瘢痕組織中，角質形成細胞及成纖維細胞各有7例和12例呈陽性。正常皮膚角質形成細胞TopoI陽性表

4、達率為14.3％，病理性瘢痕組織表達率為33.3％，差異無明顯不同(P=0.1473)；正常皮膚成纖維細胞TopoI陽性表達率為14.3％，病理性瘢痕陽性總表達率為57.1％，存在明顯差異(P=0.0038)。(2)1)羥基喜樹堿對成纖維細胞的增殖有明顯抑制作用，并且有明顯的劑量依賴性(相關系數(shù)為0.8675，P=0.0024)。作用24小時，48小時，72小時，IC50分別為：233ng/ml，176ng/ml及103ng/ml，無明

5、顯時間依賴性。2)羥基喜樹堿能使S期細胞增多，并且能誘導人病理性瘢痕成纖維細胞產生凋亡，在作用時間為24小時，藥物濃度達到250ng/ml時，細胞可出現(xiàn)明顯的凋亡峰，成纖維細胞隨羥基喜樹堿藥物濃度增加而凋亡增加。3)500ng/ml羥基喜樹堿藥物干預成纖維細胞24小時后，提取出來的DNA經過1％瓊脂糖凝膠電泳，呈現(xiàn)為細胞凋亡后特異梯狀條帶。 結論：在病理性瘢痕組織成纖維細胞中，拓撲異構酶Ⅰ的表達明顯高于正常皮膚成纖維細胞；羥基喜