病理性瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞CD90表達(dá)及其生物學(xué)特征.pdf

1、目的：免疫組織化學(xué)法檢測(cè)病理性瘢痕和周?chē)Ｆつw組織中成纖維細(xì)胞CD90表達(dá)情況；采用組織塊法原代培養(yǎng)建立病理性瘢痕成纖維細(xì)胞模型；使用免疫細(xì)胞化學(xué)法、免疫熒光雙標(biāo)記法結(jié)合激光掃描共聚焦顯微鏡，檢測(cè)體外培養(yǎng)的病理性瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞中CD90表達(dá)情況，并分析CD90表達(dá)和成纖維細(xì)胞增殖、合成、收縮等功能的相關(guān)性。 方法： 1．取手術(shù)切除的瘢痕疙瘩4例、增生性瘢痕12例、正常皮膚(瘢痕邊緣)16例標(biāo)本，組織切片HE染

2、色進(jìn)一步證實(shí)臨床診斷后，分為瘢痕疙瘩組、瘢痕疙瘩周?chē)Ｆつw組、增生性瘢痕組、增生性瘢痕周?chē)Ｆつw組。 2．免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)不同組別中成纖維細(xì)胞的CD90表達(dá)情況。 3．每組標(biāo)本中選取特異性較強(qiáng)的組織塊各三例，原代培養(yǎng)這四種不同組織來(lái)源的成纖維細(xì)胞，通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)和增殖周期，檢測(cè)體外培養(yǎng)的三種成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)活性差異。 4．經(jīng)過(guò)3次傳代、自然純化后得到性質(zhì)穩(wěn)定的成纖維細(xì)胞，凍存后復(fù)蘇傳1-3代，制成細(xì)

3、胞爬片，免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法染色檢測(cè)CD90的表達(dá)情況。 5．間接法免疫熒光雙重標(biāo)記(CD90和Ⅰ型膠原蛋白、CD90和Ki-67、CD90和α-SMA)每株細(xì)胞，激光共聚焦顯微鏡下觀測(cè)細(xì)胞并攝像后，通過(guò)計(jì)算每系成纖維細(xì)胞CD90、Ⅰ型膠原蛋白、α-SMA的熒光值和Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞百分比，檢測(cè)成纖維細(xì)胞中四種蛋白的表達(dá)情況。 6．統(tǒng)計(jì)分析CD90表達(dá)與其他3種蛋白表達(dá)的相關(guān)性。 7．共聚焦多通道、多層次掃描單

4、個(gè)成纖維細(xì)胞，分析CD90和α-SMA表達(dá)的關(guān)系。 結(jié)果： 1．免疫組織化學(xué)染色顯示4例瘢痕疙瘩組織及其周?chē)Ｆつw中未發(fā)現(xiàn)CD90陽(yáng)性成纖維細(xì)胞，而12例增生性瘢痕組織中7例有較多肥大的CD90陽(yáng)性成纖維細(xì)胞，增生性瘢痕周?chē)Ｆつw中也有少量體積較小的CD90陽(yáng)性細(xì)胞。 2．組織塊法原代培養(yǎng)建立了性狀穩(wěn)定的病理性瘢痕成纖維細(xì)胞模型。 3．免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示體外培養(yǎng)不同組織來(lái)源的細(xì)胞株均表達(dá)CD90。

5、 4．免疫熒光雙重標(biāo)記結(jié)合共聚焦掃描熒光定量發(fā)現(xiàn)增生性瘢痕來(lái)源成纖維細(xì)胞的CD90表達(dá)強(qiáng)于正常皮膚的(P<0.05)，瘢痕疙瘩來(lái)源成纖維細(xì)胞的CD90表達(dá)和正常皮膚的表達(dá)無(wú)差異(P>0.05)。 5．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析未發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的各組成纖維細(xì)胞CD90表達(dá)和α-SMA、Ⅰ型膠原蛋白、Ki-67具有相關(guān)性。 6．單細(xì)胞共聚焦掃描發(fā)現(xiàn)CD90和α-SMA具有共區(qū)域表達(dá)和表達(dá)趨勢(shì)較一致的特點(diǎn)。 結(jié)論： 1．增