氨茶堿對TNF-a誘導下大鼠氣道平滑肌細胞中HDAC2的影響.pdf

1、目的:通過培養(yǎng)原代大鼠氣道平滑肌細胞(airway smooth muscle cells,ASMCs),觀察氨茶堿對TNF-α誘導下ASMCs分泌的炎性細胞因子和趨化因子以及對組蛋白去乙?；?(histone deacetylase2,HDAC2)表達的影響;探討HDAC2在氣道炎癥中的作用。
　　 方法:將分離的大鼠ASMCs進行傳代培養(yǎng),取第四代ASMCs隨機分為正常對照組(A組):每孔只加入DMEM;TNF-α[誘導組

2、(B組):每孔只加入TNF-α使其終濃度為10ng/ml:茶氨堿干預組(C組):每孔在加入TNF-α前2小時加入氨茶堿使其終濃度達10mg/L;地塞米松干預組(D組):每孔在加入TNF-α前2小時加入地塞米松使其終濃度達10-6M;氨茶堿+地塞米松聯(lián)合干預組(E組):每孔在加入TNF-α前2小時,加入氨茶堿和地塞米松,濃度同上。每組設5個復孔。用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)方法檢測培養(yǎng)液中IL-6、IL-8及Eotaxin的濃度,用免

3、疫印跡(Western-blot)方法檢測ASMCs中HDAC2的蛋白表達強度。
　　 結(jié)果: IL-6、IL-8和Eotaxin的濃度正常組分別為(228.0±18.5)pg/ml,(130.9±14.7)pg/ml,(153.5±8.6)pg/ml;TNF-α誘導組分別為(3221.6±121.5)pg/ml,(2512.6±137.9)pg/ml,(667.9±23.2)pg/ml,較正常對照組升高;氨茶堿組濃度分別為(5

4、58.7±15.8)pg/ml,(452.0±10.8)pg/ml,(365.5±11.0)pg/ml較TNF-α誘導組降低;氨茶堿和地塞米松聯(lián)合干預組濃度分別為(322.8±12.5)pg/ml,(225.5±13.8)pg/ml,(207.4±13.1)pg/ml,較氨茶堿干預組明顯降低;差異均有統(tǒng)計學意義(P＜O.05)。HDAC2(HDAC2/β-actin)蛋白表達正常組為O.86±0.05,TNF-α誘導組為0.57±0.0

5、6,較正常對照組降低;氨茶堿組為0.654±0.05,較TNF-α誘導組增高;氨茶堿和地塞米松聯(lián)合干預組為0.76±0.04,較氨茶堿干預組明顯增高;差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。IL-6、IL-8和Eotaxin的濃度與HDAC2蛋白含量呈線性負相關(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:氨茶堿可以增加HDAC2的表達;HDAC2的激活可下調(diào)IL-6、IL-8及Eotaxin的表達,可能與降低氣道炎癥有關;氨茶堿和地塞米松聯(lián)合應