滑膜p53基因表達對類風濕關節(jié)炎Th17、Treg及Th1-Th2細胞的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景：類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種病因不明的以慢性破壞性關節(jié)病變?yōu)樘卣鞯娜碜陨砻庖咝约膊?，以雙手、腕、膝、踝和足關節(jié)的對稱性多關節(jié)受累為主，我國的患病率大約為0.32％~～0.36％。病理上表現(xiàn)為關節(jié)滑膜的慢性炎癥、增生形成血管翳，侵犯關節(jié)軟骨、軟骨下骨、韌帶和肌腱等，造成患者關節(jié)軟骨、骨和關節(jié)囊的破壞，最終導致關節(jié)畸形和功能喪失，甚至還會造成機體其他器官，如肺、心臟、眼、腎臟等內(nèi)臟的病變。

2、 在本實驗室的前期工作中，我們已經(jīng)熟練掌握了人滑膜成纖維細胞(Fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS)的原代培養(yǎng)，摸索并確定了通過電轉染的方法將人FLS的p53基因表達進行干擾的最佳條件[1]。 目的：本研究工作將經(jīng)過p53 siRNA(small interfering RNA)干擾處理后的人FLS和RA患者的外周靜脈血中的CD4+T淋巴細胞共同培養(yǎng)，檢測FLS經(jīng)干擾后的相應生物學變化和其對CD4

3、+T淋巴細胞亞群Th17、Treg、Th1及Th2的影響，初步探討RA的病因及病理生理變化。 本論文工作主要研究內(nèi)容包括兩部分： (一)FLS內(nèi)p53表達干擾后對共培養(yǎng)的CD4+T淋巴細胞亞群的影響方法：將人FLS內(nèi)p53基因用siRNA技術干擾后的第三天，利用磁珠篩選技術得到CD4+T淋巴細胞，將其與FLS共同培養(yǎng)48h。收集所有細胞，用流式細胞術(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測CD4+T淋巴細胞亞群Th1

4、7、Treg、Th1及Th2四大成分的改變。用RT-PCR(Reverse transcription-Polymerase chain reaction)方法在mRNA水平上對IFNγ、RORγt、IL17、Foxp3的表達水平差異進行分析。 結果：人關節(jié)FLS內(nèi)p53基因被干擾后，會造成Th1、Th17細胞在CD4+T淋巴細胞亞群中百分比含量的增加，而Th2、Treg細胞沒有明顯變化。 (二)FLS內(nèi)p53表達干擾后

5、FLS的生物學改變方法：將人FLS內(nèi)p53基因用siRNA技術干擾后第五天，收集細胞群，提取總RNA，用RT-PCR方法在mRNA水平上研究細胞因子護骨素(osteoprotegerin，OPG)表達水平的差異。并用酶聯(lián)免疫吸附實驗(Enzyme-linked immunosorbentassay，ELISA)方法檢測細胞培養(yǎng)上清中IL6等細胞因子含量的差異。 結果：人關節(jié)FLS內(nèi)p53基因被干擾后，OPG表達量沒有明顯變化，而