類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞粘著斑激酶與p53對(duì)細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、背景：
　　類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）以慢性和侵蝕性滑膜炎為主要特點(diǎn)的一種自身免疫病，可影響多個(gè)關(guān)節(jié)導(dǎo)致其破壞、變形，并最終造成身體殘疾，給患者帶來(lái)極大的痛苦。RA患病率為0.5％～1%，大量研究表明成纖維樣滑膜細(xì)胞（FLS）的異常增生是RA發(fā)病的關(guān)鍵。粘著斑激酶（FAK）是一種蛋白激酶，參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在腫瘤研究領(lǐng)域，F(xiàn)AK能通過(guò)其N-末端的FERM結(jié)構(gòu)域與p53結(jié)合,進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡，即FAK可通過(guò)抑制p53基因的表達(dá)來(lái)阻止腫

2、瘤細(xì)胞凋亡從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)RA患者FLS與腫瘤細(xì)胞有許多相似的特性，如進(jìn)行性增生、遷移和侵襲，其機(jī)制可能同腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖及轉(zhuǎn)移的機(jī)制相似。我科前期研究表明，F(xiàn)AK在RA滑膜組織中表達(dá)量較正?；そM織顯著升高，且通過(guò)抗風(fēng)濕治療后，可抑制FAK表達(dá)，促進(jìn)FLS凋亡，這表明FAK在FLS的過(guò)度增生過(guò)程中起重要作用。還有研究表明，p53缺失可能參與RA滑膜組織增生這一病理過(guò)程。那么在RA的發(fā)病過(guò)程中，F(xiàn)AK是否可與p53相互作用，

3、使p53表達(dá)減少導(dǎo)致FLS過(guò)度增殖，從而參與RA的發(fā)病機(jī)制，值得研究。
　　目的：
　　1、通過(guò)體外研究FAK、p53在RA成纖維滑膜細(xì)胞中的表達(dá)，探討RA的發(fā)病機(jī)制；
　　2、探討FAK、p53對(duì)RA成纖維滑膜細(xì)胞增殖的影響，為治療RA提供新靶點(diǎn)。方法：
　　1、取確診的RA患者滑膜組織進(jìn)行體外培養(yǎng)；
　　2、對(duì)體外培養(yǎng)的RA患者滑膜細(xì)胞進(jìn)行不同處理，分別加入TNF-α（10ng/ml）及不同濃度的蛋白酶

4、抑制劑（MG-132）（1μM、5μM、10μM、20μM），48h后RT-PCR檢測(cè)各組FLS上FAK及p53 mRNA的水平；
　　3、體外培養(yǎng)的滑膜細(xì)胞分別加入不同濃度的蛋白酶抑制劑（MG-132）（1μM、5μM、10μM、20μM），分別于處理后的24h、48h、72h、96h進(jìn)行細(xì)胞增殖試驗(yàn)；
　　4、采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。
　　結(jié)果：
　　1、TNF-α作用后滑膜細(xì)胞的FAK mRNA水

5、平較對(duì)照組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；TNF-α作用后p53 mRNA水平與對(duì)照組比較有所降低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；
　　2、MG-132作用后滑膜細(xì)胞的p53 mRNA水平較對(duì)照組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），以濃度為5μM時(shí)p53 mRNA水平最高；MG-132作用后FAK mRNA水平較對(duì)照組有所降低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；
　　3、不同濃度的MG-132作用后，F(xiàn)LS的