Rin1在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、目的：
　　 膀胱尿路上皮癌是泌尿外科的常見(jiàn)惡性腫瘤,其特點(diǎn)是易復(fù)發(fā),當(dāng)腫瘤侵及肌層時(shí)無(wú)有效的診斷方法。膀胱惡性腫瘤中最常見(jiàn)的類(lèi)型是尿路上皮癌,其余為鱗癌和腺癌等少見(jiàn)類(lèi)型。雖然膀胱癌的治療水平逐年提高,但是其死亡率仍然增加。腫瘤的分期和分級(jí)常作為預(yù)后的判斷指標(biāo),但是這些指標(biāo)特異性和敏感性較差。
　　 RIN1基因位于染色體11q13.2位點(diǎn),分子編碼區(qū)結(jié)構(gòu)2352bp。RIN1最初作為Ras蛋白的效應(yīng)因子被發(fā)現(xiàn)的,近年來(lái)

2、發(fā)現(xiàn)其在介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面發(fā)揮著重要的作用。RIN1一方面可以激活A(yù)BL酪氨酸激酶發(fā)揮其抑制細(xì)胞骨架蛋白重構(gòu)的抗侵襲功能:RIN1還與胰島受體信號(hào)通路的傳導(dǎo)和IL-3受體信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)。另一方面可以與RAB5蛋白結(jié)合介導(dǎo)EGFR、TβR等載體的內(nèi)吞和再循環(huán)過(guò)程,使得EGF、TGF-β等信號(hào)得以傳導(dǎo)下去,發(fā)揮其相關(guān)功能。
　　 研究發(fā)現(xiàn)RIN1在結(jié)腸癌中有著高水平的表達(dá)。然而,在乳腺癌中RIN1的表達(dá)卻是減少或缺失,研究中還發(fā)現(xiàn)S

3、nail能夠抑制RIN1的表達(dá),阻滯受體內(nèi)吞再循環(huán)來(lái)阻斷信號(hào)的傳導(dǎo),促進(jìn)乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移,并認(rèn)為在乳腺癌中RIN1扮演著一個(gè)抑癌基因的角色。因此,RIN1在不同腫瘤中的表達(dá)是矛盾的。
　　 這些研究均提示RIN1在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的重要作用,但是在人類(lèi)膀胱尿路上皮癌中RIN1的研究仍未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)膀胱尿路上皮癌及正常膀胱組織中RIN1的表達(dá)情況,探討膀胱尿路上皮癌中RIN1蛋白表達(dá)與病理分期,臨床分期,腫瘤大小,腫瘤

4、復(fù)發(fā),腫瘤進(jìn)展及Ki-67表達(dá)的相關(guān)性。尋找與膀胱尿路上皮癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)的分子標(biāo)記物,為膀胱尿路上皮癌的診斷,惡性程度評(píng)估及預(yù)后治療研究提供新的思路。
　　 方法：
　　 收集2010年7月-2010年11月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除的20對(duì)新鮮膀胱尿路上皮癌及癌旁正常組織。收集2004年5月-2008年11月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除的96例原發(fā)性膀胱尿路上皮癌標(biāo)本和22例癌旁正常組織標(biāo)本,

5、年齡38～71歲,平均55歲,其中69例為男性,27例為女性。所有組織用10%福爾馬林固定,石蠟包埋,連續(xù)切片,厚度4μm。生存期計(jì)算從手術(shù)日期到隨訪結(jié)尾日期,或由于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移而死亡的日期為止。癌旁組織距離腫瘤邊緣大于5cm,所有上述患者術(shù)前均未接受放療,化療。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)RIN1在膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中的表達(dá);再通過(guò)免疫蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)方法與實(shí)時(shí)定量PCR的檢測(cè)結(jié)果相互認(rèn)證;免疫組化法檢測(cè)RIN

6、1蛋白在癌組織中表達(dá)的位置及其強(qiáng)弱;通過(guò)檢測(cè)Ki-67的表達(dá),觀察腫瘤細(xì)胞增殖與RIN1的相關(guān)性;統(tǒng)計(jì)分析尿路上皮癌中RIN1蛋白表達(dá)與生存時(shí)問(wèn),復(fù)發(fā),進(jìn)展等特征的關(guān)系;Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析RIN1與無(wú)進(jìn)展生存期,無(wú)復(fù)發(fā)生存期和總體生存期的預(yù)后因素關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 Real-timePCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),在20對(duì)新鮮的膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中,有16對(duì)的癌組織中R1N1表達(dá)高于癌旁組織。在膀胱尿路上皮癌組織中

7、,RIN1的mRNA表達(dá)平均倍數(shù)為(11.48±5.71),在癌旁組織中表達(dá)平均倍數(shù)(4.56±1.95)(P=0.004)。Westernblot結(jié)果認(rèn)證了RIN1在尿路上皮癌組織中的表達(dá)是升高的。
　　 免疫組化法發(fā)現(xiàn),RIN1蛋白主要在癌細(xì)胞的胞漿和胞核中表達(dá),出現(xiàn)黃色或棕黃色的細(xì)小顆粒著色為陽(yáng)性細(xì)胞。在正常組織染色評(píng)分中RIN1蛋白有很少的細(xì)胞染色(根據(jù)我們的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)≤2分),將其視為正常表達(dá)。而尿路上皮癌中的RIN1表

8、達(dá)隨著惡性程度的增高而逐漸升高。免疫組化法檢測(cè)Ki-67時(shí)發(fā)現(xiàn),Ki-67的表達(dá)與RIN1標(biāo)記的惡性程度呈正相關(guān)性(R=0.232,P=0.023)。RIN1表達(dá)的高低與病理分級(jí)(P=0.004),臨床分期(P=0.046),腫瘤進(jìn)展(P=0.047)相關(guān),而與年齡,性別,腫瘤大小,是否多發(fā)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。RIN1表達(dá)的陽(yáng)性率在PUNLMP,LGPUC,HGUC病理分級(jí)中分別是15.4%,48.0%,65.5%(P

9、＜0.05)。在臨床分期的分析中發(fā)現(xiàn)pTa,T1,T2-T4中RIN1的陽(yáng)性率分別為39.5%,57.7%,68.7%,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 通過(guò)生存分析法來(lái)辨別RIN1對(duì)生存時(shí)間的影響,在RIN1高表達(dá)組中發(fā)現(xiàn)5年生存率為29%,平均生存期為43.6±4.2個(gè)月。而在RIN1低表達(dá)組中5年生存率為43%,平均生存期為55.3±4.4個(gè)月,Log-rank檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)總體生存期間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.046

10、)。因此,低表達(dá)的RIN1組獲得更長(zhǎng)的生存時(shí)間。在生存期評(píng)估中發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的RIN1蛋白與腫瘤復(fù)發(fā)無(wú)相關(guān)性(P=0.261),而與腫瘤的進(jìn)展有差異性(P=0.036)。
　　 通過(guò)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸多因素分析膀胱尿路上皮癌患者的無(wú)進(jìn)展生存期,無(wú)復(fù)發(fā)生存期和總體生存期后發(fā)現(xiàn),在總體生存期中高表達(dá)RIN1的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度為3.22(950CI1.17-8.88),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.023)。通過(guò)分析RIN1的表達(dá)與無(wú)進(jìn)展生存期和

11、無(wú)復(fù)發(fā)生存期的關(guān)系,我們發(fā)現(xiàn)對(duì)于RIN1低表達(dá)和高表達(dá)的無(wú)進(jìn)展生存期,其相對(duì)危險(xiǎn)度為20.18(95%CI2.79-146.11,P=0.003);而對(duì)于無(wú)復(fù)發(fā)生存期,其相對(duì)危險(xiǎn)度為3.97(95%C10.93-16.95,P=0.063)。RIN1可以作為生存與進(jìn)展的獨(dú)立預(yù)后因素,RIN1的表達(dá)可以作為膀胱尿路上皮癌一個(gè)潛在的預(yù)后因素。
　　 結(jié)論：
　　 1.RIN1在膀胱尿路上皮癌組織中的mRNA和蛋白的表達(dá)水平高