養(yǎng)殖池塘中降解氨氮有益微生物的分離與鑒定.pdf

1、本實驗在6月到10月期間采集日照和東營兩個蝦蟹養(yǎng)殖區(qū)四種不同的養(yǎng)殖模式池塘中的水樣和底泥并分離樣品中的細菌,篩選降解氨氮效果良好的菌株,對不同月份分離的菌株進行統(tǒng)計;通過16SrDNA對所篩選到的菌株進行序列分析,確定菌株的種類;結(jié)合菌株對氨氮和亞硝酸鹽降解率和菌種類型挑選出兩種不同類型的細菌,并將其分別添加到凡納濱對蝦的養(yǎng)殖環(huán)境中,驗證了兩株細菌對凡納濱對蝦的安全性。主要研究結(jié)果如下:
　　1.養(yǎng)殖池塘中氨氮降解微生物的分離和篩

2、選
　　采用直接分離和富集培養(yǎng)分離法,從日照和東營4種不同蝦蟹養(yǎng)殖模式的池塘中分離多株亞硝化細菌和硝化細菌。采用直接分離共從6月日照的樣品中分離純化到66株細菌,通過篩選得到20株可高效降解亞硝酸鹽的硝化細菌,14株高效降解氨氮的亞硝化細菌;采用富集培養(yǎng)分離法,從所有不同月份的樣品中分離篩選出233株亞硝化細菌和201株硝化細菌,經(jīng)過篩選培養(yǎng)基篩選最終得到66株對亞硝酸鹽具有較高降解能力而且效果穩(wěn)定的菌株,降解率中最高的可達到10

3、0％;13株對氨氮具有較高降解能力而且效果穩(wěn)定的菌株,降解最高的達到了83.63%。對分離菌株數(shù)量進行統(tǒng)計,結(jié)果表明6、7、8三個月份分離得到的菌株數(shù)量較多。通過比較兩種不同分離方式分離的菌株,富集培養(yǎng)法較直接分離法具有一定的優(yōu)勢。
　　2.養(yǎng)殖池塘中氨氮降解微生物的鑒定
　　對上一章中所篩選到的所有具有高降解能力的菌株進行鑒定。16SrDNA序列分析表明,鑒定的菌株中與標準菌株Marinobacter spp.(18株)和

4、Pseudoalteromonas spp.(21株)相似度在97%以上,這兩類細菌的豐度最高;與Vibrio spp.相似性在99%以上的菌株次之(7株),其次為Halomonas spp.(4株),Marinomonas spp.(3株),Desemzia incerta(1株),Exiguobacterium aurantiacum(1株),Alteromonas spp.(1株),Thalassospira spp.(1株),S

5、phingomonas spp.(1株),菌株的相似性均在99%以上。綜合菌株的類型、降解率和分離源,挑選兩株細菌(菌株7RO29和菌株8DH26),結(jié)合形態(tài)觀察、生理生化指標測定以及16S rDNA序列分析等方法對兩株菌進行分類學鑒定,結(jié)果表明該兩株菌分別為鹽單胞菌(Halomonas sp.)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。
　　3.分離的微生物對凡納濱對蝦的安全性檢驗
　　為檢驗菌株7RO29和