四川泡菜中嗜鹽微生物的分離與鑒定.pdf

1、本文通過菌落形態(tài)特征、SSU rRNA(16S rRNA、18S rRNA)、ISR(26S rRNA D1/D2區(qū)系統(tǒng)發(fā)育、16S-23S rRNA ISR區(qū)間分析)和脂肪酸分析等分離鑒定四川泡菜鹽鹵中的嗜鹽微生物，為解析鹽鹵中嗜鹽菌在四川泡菜發(fā)酵過程中的生物學過程和四川泡菜風味的形成機理提供了前期基礎。是廣泛應用于所有生物進化關系研究的分子標識。
　　從四川泡菜鹽鹵中分離獲得54株嗜鹽細菌。所有分離菌株皆為革蘭氏陽性菌，其中Z

2、Q1和ZQ4最適NaCl生長濃度為7%(w/v)，ZQ26最適NaCl生長濃度為12%(w/v)。其余51株菌的NaCl生長濃度范圍為0%-20%(w/v)，最適生長濃度6%(w/v)，不產生吲哚，酪素水解、明膠液化、淀粉水解和馬尿酸水解為陰性，過氧化氫酶和脂酶為陰性。16S rRNA序列分析表明：54株菌分別屬于細菌域的Virgibacillus，Staphylococcus和Oceanobacillus屬。菌株ZQ1、ZQ4與Vir

3、gibacillus halodenitrificans的16S rRNA基因序列相似性為99%；菌株ZQ26與Staphylococcus cohnii的相似性為99%，其余菌株與Oceanobacillus oncorhynchi在16S rRNA水平上相似性為98%-99%。作為優(yōu)勢菌的O.oncorhynchi在16S-23S rRNA ISR水平的分析進一步表明：51株O.oncorhynchi被分成五個亞類，這五個亞類的代表

4、菌株ZQ30、ZQ35、ZQ36、ZQ42和ZQ52的全細胞脂肪酸的種類和含量皆存在差異。這一結果暗示了鹽鹵中的O.oncorhynchi菌在種內水平上已經發(fā)生了分化。
　　從四川泡菜鹽鹵中分離獲得34株嗜鹽酵母菌。分離菌最適生長溫度為25-28℃，NaCl生長范圍為0%-12%（w/v），具膜，有假菌絲，產生子囊，不產生淀粉，尿素水解、醋酸產生、重氮基藍B（DBB）為陰性，脲酶為陰性。18S rRNA序列分析表明：34株菌屬于P

5、ichia屬，分離菌株的18S rRNA序列與Pichia manshurica的18S rRNA序列相似性達到99.22%以上。分離菌株的26S rRNA D1/D2區(qū)序列與P.manshurica的26S rRNA D1/D2區(qū)序列相似性達到99.90%以上，進一步證實了分離菌株為畢赤酵母屬P.manshurica。而代表菌株P42、P43、P45、P5和P55菌株在脂肪酸種類和含量上均有差異。這一結果暗示了鹽鹵中的P.manshu