對蝦養(yǎng)殖池塘有益芽孢桿菌的分離篩選及特性初步研究.pdf

1、益生菌在調(diào)節(jié)、改善和修復(fù)養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境、提高養(yǎng)殖動(dòng)物生長速度以及增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物抗病能力方面的應(yīng)用研究已經(jīng)非常多,而且益生菌的應(yīng)用也得到了人們的廣泛認(rèn)可。目前,在眾多益生菌中,芽孢桿菌(Bacillus)因其具有抗逆性強(qiáng)、生長迅速、易培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn),已被越來越多的關(guān)注和研究。大量研究表明,芽孢桿菌(Bacillus)具有較強(qiáng)的分解水體中的有機(jī)物、降解水體中的氨氮和亞硝氮以及硫化氫等有毒物質(zhì)、促進(jìn)水體中藻類生長以改善水質(zhì)以及抑制水體中有害菌的生長從

2、而提高養(yǎng)殖動(dòng)物抗病能力等功效。由于添加的外源性菌制劑存在針對性和適應(yīng)差等缺點(diǎn),因此,分離和培養(yǎng)水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中的優(yōu)良芽孢桿菌,并對具有優(yōu)良降解性能的芽孢桿菌進(jìn)行馴化和優(yōu)化,對水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境的優(yōu)化和菌制劑的開發(fā)具有重要的理論意義。
　　本研究從對蝦養(yǎng)殖環(huán)境中分離芽孢桿菌,對芽孢桿菌的降解性能進(jìn)行優(yōu)化,旨在為對蝦養(yǎng)殖環(huán)境的生物修復(fù)實(shí)踐應(yīng)用提供理論依據(jù)。研究獲得的具體結(jié)果如下:
　　1.對蝦養(yǎng)殖池塘有益芽孢桿菌的富集馴化與分離篩選

3、r>　　本研究在常溫(28±1)℃下對對蝦養(yǎng)殖池塘中的芽孢桿菌進(jìn)行馴化和分離篩選。篩選所用指標(biāo)主要為菌株對對蝦飼料浸出液中的氮的利用能力,包括氨氮(NH4-N)和亞硝氮(NO2-N),最后得到5株降解菌(E1、E6、E13、E15、E21)。研究表明,分離自對蝦池塘的各菌株對餌料中氮(NH4-N和NO2-N)的降解性能有所差異。其中E1、E6和E15對氨氮的降解效果較好,第5d時(shí)的去除率達(dá)到44.20％-48.20%;E1、E6、E15

4、和E21均具有較高的亞硝氮降解效果,第5d亞硝氮的去除率均高達(dá)70.00%,其中以菌株E6和E15效果最好,E15在第5d時(shí)的亞硝氮去除率高達(dá)99.72%,而菌株E6則將餌料浸出液中的亞硝氮徹底去除(去除率為100%)。根據(jù)菌株對氨氮和亞硝氮降解的綜合效果,篩選出4株降解菌(E1、E6、E15、E21)進(jìn)一步研究。根據(jù)菌株的形態(tài)特征、生理生化特性以及16Sr DNA序列分析,E1、E6、E15、E21四株細(xì)菌均歸屬于芽孢桿菌屬(Baci

5、llus spp.),其中E1初步鑒定為巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium),E6初步鑒定為短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus),E15初步鑒定為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)。
　　2.一株益生芽孢桿菌降解特性研究
　　本研究以菌株對對蝦餌料中的氨氮和亞硝氮兩種成分的降解利用效果為依據(jù),對降解效果最好的菌株E6的特性進(jìn)行了深入研究。研究顯示,菌株E6具有較好的生長

6、和降解特性。E6接種后(6-22h)內(nèi)迅速生長,為生長對數(shù)期,至24h達(dá)到生長最大值。研究發(fā)現(xiàn),菌株E6的降解動(dòng)態(tài)過程顯著,其中富集培養(yǎng)基中的氨氮含量在E6接種后的第2天達(dá)到最低值,去除率高達(dá)57.27﹪;富集培養(yǎng)基中亞硝氮的含量連續(xù)5d一直是降低的,其中在菌株培養(yǎng)至第4d時(shí),富集培養(yǎng)基中的亞硝氮含量低至0.24mg/L,其對亞硝氮的去除率高達(dá)98.02﹪,培養(yǎng)至第5d時(shí),菌株已將富集培養(yǎng)基中的亞硝氮徹底去除(去除率達(dá)100﹪)。進(jìn)一步

7、研究表明,菌株E6的生長適溫為(24-36)℃,適宜鹽度為(1-8)﹪,適宜pH7.0-9.0。菌株降解對蝦飼料中的氨氮和亞硝氮的最適溫度為(24-32)℃,最適鹽度為(3-6)﹪,最適pH為7.5-8.0。
　　3.幾株益生芽孢桿菌的優(yōu)化組合及降解特性研究
　　本研究根據(jù)菌株對對蝦餌料中的氨氮和亞硝氮去除率效果,對篩選自對蝦養(yǎng)殖池塘的對氨氮和亞硝氮降解效果較好的芽孢桿菌進(jìn)行了菌株以及初步的菌株優(yōu)化組合的動(dòng)態(tài)降解效果研究。單

8、菌株動(dòng)態(tài)降解效果研究結(jié)果表明,在降解餌料中的氨氮方面,四菌株(E1、E6、E15和E21)在培養(yǎng)后的第2d的去除率分別為50.90%、57.27%、46.77%和50.54%,具有較高的降解效果,此后的3d,去除率有所下降,除菌株E21外,其他3株菌的去除率仍高達(dá)40%以上,對餌料中的氨氮具有較好的去除效果。在降解亞硝氮方面,各菌株對餌料中的亞硝氮去除效果明顯,其中菌株E15和E21在第3d的去除率分別高達(dá)97.78%和93.07%。菌