N-琥珀酰殼聚糖的合成及其包載槐定堿微球制備工藝的研究.pdf

1、目的：殼聚糖及其衍生物是各種藥物可控釋放載體中很有前途的候選輔料，但因殼聚糖僅溶于一些酸性介質(zhì)，而不能溶于水，在很大程度上限制了它的推廣應(yīng)用。N-琥珀酰殼聚糖是殼聚糖琥珀?；难苌?，其鈉鹽形式可溶于水，具有更大的適用性。生物學(xué)研究結(jié)果表明水溶性N-琥珀酰殼聚糖較殼聚糖具有更低的毒性、更長的體內(nèi)半衰期，在體內(nèi)的降解速度較慢，并能選擇性地蓄積于腫瘤組織，是一種優(yōu)良的抗腫瘤藥物的靶向載體。由于市場上尚未有N-琥珀酰殼聚糖出售，因此本課題的目

2、的是探討N-琥珀酰殼聚糖的合成工藝，并考察其對幾種腫瘤細(xì)胞的親和性，最后進(jìn)行N-琥珀酰殼聚糖作為水溶性藥物槐定堿微球包載材料的可行性研究。 方法：(1)N-琥珀酰殼聚糖的合成工藝研究：用化學(xué)法降解得到不同分子量范圍的殼聚糖，與丁二酸酐反應(yīng)生成不同分子量范圍的N-琥珀酰殼聚糖，通過其取代度、溶解性和紅外光譜的測定，驗(yàn)證并確定N-琥珀酰殼聚糖的合成工藝。(2)N-琥珀酰殼聚糖與腫瘤細(xì)胞親和性實(shí)驗(yàn)的研究：不同分子量的N-琥珀酰殼聚糖用

3、異硫氰酸熒光素進(jìn)行熒光標(biāo)記后，分別與人胚肺成纖維細(xì)胞、肺癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、結(jié)腸癌細(xì)胞共孵育，通過熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的熒光強(qiáng)度來確定其與腫瘤細(xì)胞親和性的強(qiáng)弱。(3)槐定堿N-琥珀酰殼聚糖微球制備工藝的研究：通過單因素考察和星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化了用乳化-交聯(lián)法制備槐定堿微球的制備工藝，并對所得微球進(jìn)行了體外釋藥機(jī)制研究。 結(jié)果：(1)確定的N-琥珀酰殼聚糖的合成工藝：殼聚糖用醋酸溶解后用丙酮稀釋，滴加丁二酸酐的

4、丙酮溶液常溫下反應(yīng)5小時，殼聚糖與丁二酸酐的配比為1:2，過濾后濾餅用無水乙醇分散，NaOH調(diào)pH值到8～10，過濾即得，樣品的平均取代度為0.369，水溶性符合要求，紅外圖譜表明合成了N-琥珀酰殼聚糖。(2)除了分子量最大的N-琥珀酰殼聚糖樣品外，其余四種分子量的N-琥珀酰殼聚糖與肺癌A549細(xì)胞的親和性隨著分子量的降低而逐漸增強(qiáng)。N-琥珀酰殼聚糖與肺癌A549細(xì)胞的親和性強(qiáng)于正常人肺細(xì)胞及其它腫瘤細(xì)胞，可選擇性地與肺癌細(xì)胞結(jié)合。在實(shí)

5、驗(yàn)中確定的安全劑量下未發(fā)現(xiàn)對各種細(xì)胞有任何毒性反應(yīng)。(3)優(yōu)化的用乳化-交聯(lián)法制備槐定堿微球的最佳工藝為：藥物與N-琥珀酰殼聚糖投藥比為1:10，2％N-琥珀酰殼聚糖為水相，液體石蠟為油相，水/油相比例為1:8，2％Span-80為乳化劑，乳化45min，2.5％的甲醛為交聯(lián)劑，40℃加熱交聯(lián)固化5h，冰浴硬化2h。最佳工藝制備的微球平均粒徑為12.49μm，包封率為73.2％，開始釋放較快，2小時釋放累積達(dá)36％，后釋放緩慢，24小時