N-琥珀酰殼聚糖納米粒的制備及其體外活性和抗腫瘤性研究.pdf

1、殼聚糖是一種天然高分子化合物，由甲殼素脫乙酰基而得，由于其低毒性和良好的生物相容性，近階段逐步應用于藥物載體等方面的研究。又因為其龐大的分子量和無規(guī)則的空間結(jié)構(gòu)致使其溶解性能較差，因而在醫(yī)藥等領(lǐng)域的應用受到了限制。N-琥珀酰殼聚糖是殼聚糖的N-?；苌铮蓺ぞ厶呛投《狒铣啥?。N-琥珀酰殼聚糖較殼聚糖溶解性能有較大改善，且具備殼聚糖在生物體內(nèi)相容性好、無毒性和粘附性強等優(yōu)點，因此拓寬了殼聚糖的應用范圍，是一種性能優(yōu)異、前景開闊的載

2、藥體介質(zhì)。
　　 本文首先用間歇式濃堿法對購得的原料殼聚糖進行乙?；拿摮?，制備得到高脫乙酰度殼聚糖，通過簡便的酸堿滴定法測得其脫乙酰度從88.65％提高到97.62％，并對其進行紅外表征，從紅外圖譜分析得乙酰基已基本脫除;然后采用雙氧水氧化降解法對高脫乙酰度殼聚糖進行相對分子質(zhì)量的降解，得到不同降解時間的低相對分子質(zhì)量殼聚糖，用烏式粘度法測量高脫乙酰度殼聚糖和低相對分子質(zhì)量殼聚糖的分子量，得出殼聚糖的分子量隨降解時間的延長而大

3、大減小的結(jié)論，之后進行紅外表征，從紅外圖譜分析得雙氧水降解法基本保持殼聚糖分子結(jié)構(gòu)的完整;之后進行N-琥珀酰殼聚糖的合成實驗及表征，原料選取之前降解20min，分子量為21000的低相對分子質(zhì)量殼聚糖和丁二酸酐，采用乙酸/丙酮體系，室溫下合成N-琥珀酰殼聚糖，經(jīng)電位滴定法測量得到其等電點范圍為3～8.2，經(jīng)過紅外表征，從紅外圖譜上分析得到殼聚糖已經(jīng)已經(jīng)在N-位成功引入琥珀?；?，制備得道N-琥珀酰殼聚糖，經(jīng)核磁表征，從1H-NMR譜圖分析

4、得到N-琥珀酰殼聚糖的取代度為0.58，經(jīng)熱失重分析，N-琥珀酰殼聚糖的熱分解溫度是256℃。
　　 本文對N-琥珀酰殼聚糖進行了納米化，通過離子誘導法制備得到具備載藥形態(tài)的N-琥珀酰殼聚糖納米粒，并對其載藥性能進行了研究。實驗得到的N-琥珀酰殼聚糖納米粒經(jīng)粒徑測定達到149.4nm，表面電位經(jīng)電位分析儀測量得9.99mv，納米粒體系較為穩(wěn)定，TEM分析納米粒表面形態(tài)，從透鏡照片可以看出納米粒的形態(tài)完整;同時本文也制備了負載重組

5、人內(nèi)皮抑素的N-琥珀酰殼聚糖納米粒，從透射電鏡照片得出載藥納米粒與空白納米粒形態(tài)不同，載藥性能良好，利用蛋白定量法檢測N-琥珀酰殼聚糖納米粒的內(nèi)皮抑素包封率，得到納米粒的平均包封率為94.76％。
　　 本文對N-琥珀酰殼聚糖納米粒進行體外細胞活性評價，并對載重組人內(nèi)皮抑素的N-琥珀酰殼聚糖納米粒進行了體外抗腫瘤活性研究。本文通過MTT實驗觀察N-琥珀酰殼聚糖納米粒即空白藥物載體對NIH正常細胞增殖作用的影響，結(jié)果表明不同濃度的

6、納米粒懸液對細胞生殖作用的影響程度不同，但是抑制率都較小，證明N-琥珀酰殼聚糖納米粒對正常細胞并無毒性。通過MTT實驗考察了載內(nèi)皮抑素的N-琥珀酰納米粒的體外抗腫瘤活性，內(nèi)皮抑素是外源性的強效腫瘤血管生成抑制因子，實驗結(jié)果表明，載藥載體對腫瘤細胞MCF-7生殖作用的抑制要好于同濃度下的內(nèi)皮抑素原液，說明以N-琥珀酰殼聚糖納米粒作為載藥載體，內(nèi)皮抑素對腫瘤細胞的抑制作用得到了加強，進一步證明了N-琥珀酰殼聚糖納米粒在載藥體研究方面的可行性