肝靶向乳糖化去甲斑蝥素-N-乳糖酰殼聚糖納米粒的研制.pdf

1、目的：去唾液酸糖蛋白受體(ASGP—R)是一種表達在肝實質(zhì)細胞表面的專一性識別末端含有半乳糖或乙酰氨基半乳糖的糖蛋白。本課題采用乳糖修飾去甲斑蝥素(Lac—NCTD)與乳糖修飾殼聚糖(GC)為原料制備納米粒，以期被肝細胞去唾液酸糖蛋白受體識別達到主動靶向和被動靶向雙重效果。并對Lac—NCTD及其制劑在大鼠肝微粒體中的代謝進行初步考察，為更進一步的研究提供依據(jù)。
　　 方法：(1)采用離子交聯(lián)法制備乳糖化去甲斑蝥素/N—乳糖酰殼

2、聚糖納米粒，以粒徑、PDI、包封率、載藥量為指標(biāo)，使用正交設(shè)計優(yōu)化制備處方。(2)通過紅外光譜、差示掃描量熱分析、X射線衍射和透射電鏡等技術(shù)，對納米粒進行質(zhì)量評價，并考察納米粒膠體的釋放特征。(3)考察納米粒在H22荷瘤小鼠體內(nèi)的抗腫瘤活性，通過腫瘤體積增長、抑瘤率、腫瘤病理切片對抗腫瘤活性進行評價。(4)通過MTT法考察Lac—NCTD對肝癌細胞SMMC—7721、HepG2的半抑制率IC50，為體外細胞攝取實驗劑量設(shè)置提供依據(jù)。(5

3、)采用HPLC法評價肝癌細胞SMMC—7721、HepG2對Lac—NCTD、Lac—NCTD CS NPs、Lac—NCTD GC NPs的攝取作用。(6)通過差速離心法提取大鼠肝微粒體，考察Lac—NCTD及其納米粒在大鼠肝微粒體中的代謝，求算酶促反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)。(7)考察選擇性CYP酶抑制劑對Lac—NCTD代謝的影響。
　　 結(jié)果：(1)正交優(yōu)化出的Lac—NCTD GC NPs的制備工藝為：殼聚糖溶液濃度2．5mg·m

4、L—1、藥物載體重量比例25％、溫度30℃；采用優(yōu)化工藝制備的納米粒包封率(73．82±0．51)％，載藥量(13．40±0．08)％，粒徑(142．22±5．20)％，PDI(0．121±0．049)。(2)納米粒形態(tài)圓整，粒徑與激光粒徑測試儀結(jié)果一致，不同介質(zhì)中的釋放均符合Higuchi方程。(3)各實驗組的抑瘤率與空白組比較均有統(tǒng)計學(xué)差異，抑瘤率大小依次為Lac—NCTD—GC—NPs>Lac—NCTD—CS—NPs>Lac—NC

5、TD>NCTD。兩種納米粒都可以增強Lac—NCTD對小鼠腫瘤的抑制作用，經(jīng)半乳糖修飾的納米粒更可提高對小鼠實體瘤的抑制作用，反映了其在體內(nèi)良好的肝靶向分布和抗腫瘤活性。(4)兩種納米粒對肝癌細胞SMMC—7721和HepG2的親和力都比Lac—NCTD強，表現(xiàn)出納米粒的被動靶向作用；Lac—NCTD GC NPs比Lac—NCTD CS NPs具有更高的攝取量，顯示出主動靶向作用。(5)原料藥和Lac—NCTD GC NPs的最大反應(yīng)

6、速率(Vmax)和米氏常數(shù)(Km)有差異，且肝內(nèi)清除率(CLint)比較，原料藥組要大于Lac—nctd—NP組(P<0．05)，納米粒在大鼠肝微粒體中的代謝較原料藥組慢，推斷Lac—NCTD GC NPs可延緩藥物代謝，從而提高生物利用度。(6)CYP3A的特異性抑制劑Ket可以顯著的抑制Lac—NCTD的代謝，而其他抑制劑對Lac—NCTD的代謝無明顯抑制作用。
　　 結(jié)論：制備的納米粒粒徑均勻，形態(tài)圓整，在體外具有緩釋特性