去甲斑蝥素絲素蛋白-殼聚糖肝動(dòng)脈緩釋栓塞微球的制備與藥效學(xué)研究.pdf

1、目的：本文以去甲斑蝥素(norcantharidin, NCTD)為模型藥物，包載入以生物材料絲素蛋白(silk fibroin，SF)及優(yōu)良成形性材料殼聚糖(chitosan，CS)為載體的骨架微球中，制備了去甲斑蝥素絲素蛋白/殼聚糖肝動(dòng)脈緩釋栓塞微球(Norcantharidin loaded silk fibroin/chitosan microspheres,NCTD-SF/CS-MS)。建立了家兔肝癌模型并通過肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)

2、(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)治療肝癌，用以考察微球藥效學(xué)。以期達(dá)到緩釋、靶向、栓塞三重功效，降低藥物毒副作用，抑制腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移，探索臨床治療不可切除性肝癌新方法。
　　方法：
　　(1)采用乳化-固化法，制備去甲斑蝥素絲素蛋白/殼聚糖微球(NCTD-SF/CS-MS)。單因素考察包括殼聚糖濃度、轉(zhuǎn)速、乳化劑加入量、戊二醛用量等條件；并選定殼聚糖濃度、戊二

3、醛用量、藥載比三項(xiàng)為因素，載藥量、包封率、收率三項(xiàng)為指標(biāo)，采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法(central composite design,CCD)進(jìn)行微球制備處方的優(yōu)化與驗(yàn)證。
　　(2)采用掃描電鏡(SEM)觀察微球的表面形態(tài)，光學(xué)顯微鏡計(jì)算平均粒徑及粒徑分布。采用紅外光譜(FT-IR)、X-粉末衍射法(X-RD)和差示掃描量熱法(DSC)驗(yàn)證載體及微球的結(jié)構(gòu)特征。并對(duì)微球的粉體學(xué)性質(zhì)、吸水膨脹性，懸浮性及導(dǎo)管推注實(shí)驗(yàn)進(jìn)行考察。

4、>　　(3)體外釋放采用體外動(dòng)態(tài)透析法，在PBS7.4緩沖液中測定不同粒徑載藥微球的釋藥性能，以及與實(shí)驗(yàn)組前期研究的去甲斑蝥素殼聚糖微球(NCTD-CS-MS)進(jìn)行對(duì)比。同時(shí)考察微球的穩(wěn)定性。
　　(4)選用新西蘭大白兔作為模型動(dòng)物，采用超聲引導(dǎo)下穿刺針法，于兔肝左葉植入VX2瘤塊建立肝癌動(dòng)物模型。B超監(jiān)測腫瘤生長大小及速率，并用影像學(xué)手段及病理表現(xiàn)評(píng)估建模成功率。
　　(5)將荷瘤兔隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為：NCT

5、D-SF/CS-MS組(100~200/μm)、NCTD-CS-MS組(100~200/μm)、空白微球(blank-microsphere，B-MS)組(100~200/μm)、NCTD溶液組(NCTD)及空白對(duì)照組(Control Group)，含藥各組藥載量為1.0mg·kg-1。實(shí)驗(yàn)兔行肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)，注入制劑或藥物，B超，CT，MR以及病理切片觀察各組治療效果以及TACE對(duì)肝功能的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)單

6、因素考察表明殼聚糖濃度，藥載比對(duì)微球特性影響較大，而戊二醛用量對(duì)微球緩釋性能影響較大。采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化工藝制備所得的微球包封率(27.80±1.25)%，載藥量(15.08±2.85)%，收率(34.12±3.82)%，光鏡法得出平均粒徑為(184±5)μm，滿足栓塞微球的要求。
　　(2)掃描電鏡照片顯示微球外觀圓整，表面光滑，分散良好。FT-IR、X-RD和DSC圖譜表明殼聚糖與絲素蛋白間產(chǎn)生較強(qiáng)分子間作用力，使結(jié)構(gòu)

7、緊密，去甲斑蝥素分散包埋在微球骨架中。粉體學(xué)性質(zhì)考察結(jié)果符合要求，流動(dòng)性好，吸水膨脹性實(shí)驗(yàn)結(jié)果滿足膨脹要求。微球懸浮性好，不堵塞導(dǎo)管，推注順利。
　　(3)載藥微球能夠緩慢釋放14天左右，釋放速率符合威布爾模型；NCTD-SF/CS-MS緩釋效果比NCTD-CS-MS好。微球穩(wěn)定性良好，劇烈條件下重量、載藥量和包封率差異均不是很大。
　　(4)利用超聲引導(dǎo)穿刺針種植操作方便，模型穩(wěn)定。B超，CT和MR結(jié)果表明建模成功率為87

8、.5%。
　　(5)綜合腫瘤體積和生長速率，動(dòng)物生命延長率以及病理結(jié)果顯示，兩種藥物微球組相對(duì)于空白微球組、NCTD溶液組及空白對(duì)照組均有顯著的治療效果，其中NCTD-SF/CS-MS組動(dòng)物生命延長率為41.66%，更優(yōu)于較NCTD-CS-MS組的31.89%，病理切片顯示大片凝固性壞死。DSA結(jié)果顯示栓塞徹底，幾乎沒有側(cè)枝循環(huán)。生化指標(biāo)結(jié)果表明，給藥組術(shù)后均呈現(xiàn)一過性的肝損傷，藥物微球組損傷相對(duì)嚴(yán)重。
　　結(jié)論：本文制備的