Necrostatin-1對腦外傷后自噬及凋亡的影響.pdf

1、目的：在小鼠腦外傷模型上研究程序性壞死特異性抑制劑necrostatin-1對腦外傷導(dǎo)致的自噬、凋亡、組織損傷和神經(jīng)功能損害的影響。
　　方法：采用改良的自由落體裝置，建立成熟雄性小鼠定量腦外傷(traumatic brain injury, TBI)模型。在腦外傷前通過單側(cè)側(cè)腦室注射 Necrostatin-1(NEC-1)給藥，并在傷后不同時(shí)間分別于處死前1 h腹腔注射碘化丙啶(propidium iodide, PI)，采用

2、體視學(xué)顯微鏡觀察并計(jì)數(shù)各組損傷及其周邊區(qū)(皮質(zhì)與海馬)PI陽性細(xì)胞數(shù)量。為了進(jìn)一步確證PI陽性細(xì)胞能否代表腦外傷引起的細(xì)胞死亡和丟失，我們利用組織缺損體積(lesion volume, LV)對TBI后腦組織損傷程度進(jìn)行評估；同時(shí)利用行為學(xué)試驗(yàn)(Motor Test和Morris水迷宮試驗(yàn))評估TBI后各組小鼠的運(yùn)動(dòng)和學(xué)習(xí)記憶的情況，以探究腦外傷導(dǎo)致的組織學(xué)損傷能否導(dǎo)致神經(jīng)功能損害。為了進(jìn)一步探究 NEC-1是否能夠影響腦外傷后自噬和凋

3、亡的活性，我們利用免疫印記法分別檢測了自噬活性相關(guān)蛋白(Beclin-1，LC3，P62)和凋亡活性相關(guān)(Bcl-2，caspase-3)的表達(dá)水平。同時(shí)為了進(jìn)一步確證NEC-1對腦外傷后自噬和凋亡活性的影響，我們也利用了自噬及凋亡的抑制劑(3MA，Z-VAD)聯(lián)合NEC-1檢測了caspase-3和LC3-II的表達(dá)。
　　結(jié)果：NEC-1減少了TBI引起的細(xì)胞丟失數(shù)量、組織缺損體積，并降低了TBI后造成的神經(jīng)功能損害程度。免疫

4、印跡結(jié)果表明NEC-1能夠降低TBI后自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3-II的表達(dá)和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、caspase-3的活性。聯(lián)合使用3MA和Z-VAD進(jìn)一步證實(shí)了NEC-1的作用，并且表明在TBI后24小時(shí)3MA可以同時(shí)降低LC3-II和caspase-3的表達(dá)，而Z-VAD只降低了caspase-3表達(dá)卻增加了LC3-II的轉(zhuǎn)化。
　　結(jié)論：NEC-1能夠抑制TBI引起的自噬和凋亡活性上調(diào)，并且NEC-1對于自噬和