自噬對腦外傷引起的神經(jīng)細胞死亡及神經(jīng)功能障礙的影響.pdf

1、目的：研究自噬/溶酶體途徑對腦外傷后神經(jīng)細胞死亡和神經(jīng)功能障礙的影響并探討其相關(guān)機制。 方法：建立小鼠定量腦外傷（traumatic brain injury， TBI）動物模型，運用影響自噬體成熟的工具藥3—甲基腺嘌呤（3—methyladenine，3—MA）、布雷菲德菌素（Brefeldin A，BFA）側(cè)腦室（lateral cerebral ventricle）注射給藥，對3—MA組、BFA組及生理鹽水對照組用PI標記

2、和體視學方法觀測損傷區(qū)及其周邊區(qū)（皮層與海馬）神經(jīng)細胞死亡情況，通過連續(xù)切片蘇木精染色和體視學軟件測量腦缺損體積（lesion volume，LV），并通過行為學試驗方法（Motor test和Morris water maze）檢測TBI引起的神經(jīng)功能障礙，研究自噬對TBI引起的神經(jīng)細胞死亡和神經(jīng)功能障礙的影響；同時應(yīng)用免疫組織化學和免疫印記法檢測損傷側(cè)的腦皮質(zhì)與海馬中自噬/溶酶體途徑及凋亡信號通路相關(guān)蛋白Cathepsin—B，LC

3、3，Beclin-1，Caspase-3， Bcl-2，Bax的表達情況，研究自噬/溶酶體途徑影響TBI引起的神經(jīng)細胞死亡和神經(jīng)功能障礙的可能機制。 結(jié)果： （1） PI陽性細胞計數(shù)：TBI后1h和6h，3—MA組與生理鹽水組PI陽性細胞數(shù)均開始逐漸增加，12 h后明顯增加，但兩組之間無統(tǒng)計學差異，24 h陽性細胞數(shù)達高峰，且兩組的PI陽性細胞數(shù)有統(tǒng)計學差異（P<0．05），TBI后48 h組仍有大量的PI陽性細胞，但3

4、—MA組與生理鹽水組比較無統(tǒng)計學差異；同樣，BFA組與生理鹽水組比較，TBI后24 h，兩組的PI陽性細胞數(shù)有統(tǒng)計學差異（P<0．05）。 （2） LV檢測：與生理鹽水組比較，3—MA組、BFA組腦外傷后LV顯著減小（P<0．05）； （3）行為學檢測：與生理鹽水組比較，3—MA組和BFA組在TBI后24 h均能改善運動功能（P<0．05），48 h以后差異不顯著；3—MA組在TBI后7d到10 d能改善學習記憶能力（P

5、<0．05）； （4）蛋白表達檢測：TBI后24 h和48h，3—MA組相對與生理鹽水組Cathepsin—B，Caspase-3表達減少（P<0．05），Beclin-1/Bcl-2的比值減?。≒<0．05），Bcl-2/Bax的比值增大（P<0．05）；與生理鹽水對照組比較，TBI后24h和48 h BFA組LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值減?。≒<0．05）。 結(jié)論： 1．自噬/溶酶體途徑參與了TBI后的病理生理過