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文檔簡介
1、目的:在疼痛、脊髓損傷給藥等動物試驗中,常常需要蛛網(wǎng)膜下腔給藥。目前大鼠蛛網(wǎng)膜下腔給藥途徑主要包括蛛網(wǎng)膜下腔重復(fù)穿刺、蛛網(wǎng)膜下腔留置導(dǎo)管兩種方式,其中留置導(dǎo)管又分為椎板切除置管術(shù)以及經(jīng)皮置管術(shù)。本研究旨在對目前廣泛應(yīng)用的三種給藥途徑進(jìn)行比較,具體內(nèi)容包括評估其有效性及各自相應(yīng)的缺陷,以找出最佳的給藥方式。
方法:將實驗組SD大鼠分為三組,分別作如下手術(shù)處理:重復(fù)腰椎穿刺,椎板切除并植入導(dǎo)管以及經(jīng)皮導(dǎo)管植入。并設(shè)置空白對照組大鼠
2、。
(1)手術(shù)前后體重測定:分別于術(shù)前及術(shù)后第1、2、3、5、7、10、14稱量記錄動物的體重。將24只大鼠隨機(jī)分成4組:正常對照組,腰椎穿刺組,椎板切除置管組以及經(jīng)皮置管組,每組6只,每只大鼠稱量3次取平均值。
(2)行為學(xué)評估:為了比較手術(shù)對動物行為的影響,我們于術(shù)后第2天開始對實驗鼠的一般行為及神經(jīng)生物學(xué)行為進(jìn)行評估。具體觀察指標(biāo)包括激惹、痛覺過敏以及僵直發(fā)作。激惹主要通過自發(fā)發(fā)聲及煩亂不安來判斷;痛覺過敏表現(xiàn)
3、為逃跑反射或者輕刺激大鼠側(cè)面皮膚引起的發(fā)聲反應(yīng)。僵直發(fā)作的檢驗方法為:使大鼠的前爪略高于后爪來誘發(fā)。其強(qiáng)度由2分鐘內(nèi)僵直發(fā)作的最長時間來衡量。如果僵直反應(yīng)明顯,則觀察從僵直發(fā)作開始持續(xù)到第一次運(yùn)動的時間間隔。并記錄腦脊液漏、截癱、膀胱功能障礙、自傷行為等發(fā)生情況。
(3)Rota-Rod跑步行為學(xué)測試:檢查手術(shù)前后大鼠運(yùn)動平衡與協(xié)調(diào)功變化。
(4)傷害感受性測試:對大鼠足底進(jìn)行熱輻射刺激測試熱痛敏;測定大鼠的機(jī)械性縮
4、足反射閾值來評價大鼠機(jī)械痛敏。
(5)甩尾試驗:甩尾試驗分別于第0天(術(shù)前)、1、3、7、14天進(jìn)行,評價穿刺組與置管組的抗痛效應(yīng)。
(6)脊髓HE染色:評價穿刺組與置管組脊髓背側(cè)的炎癥反應(yīng)情況。
(7)利多卡因麻痹測試、甲苯胺藍(lán)染色試驗:確定穿刺針以及導(dǎo)管尖端的具體位置,評價其給藥的精確度。
結(jié)果:腰椎蛛網(wǎng)膜下腔重復(fù)穿刺手術(shù)成功率較低,并且引起較多的并發(fā)癥:包括異常的神經(jīng)行為學(xué)表現(xiàn)以及嚴(yán)重的運(yùn)動
5、功能障礙、痛覺過敏、脊髓背側(cè)嚴(yán)重的局部炎癥反應(yīng)。蛛網(wǎng)膜下腔留置導(dǎo)管術(shù)可以方便的進(jìn)行后續(xù)給藥,特別適合長期的藥理學(xué)及行為學(xué)研究。經(jīng)椎板切除置管術(shù)由于創(chuàng)傷大,嚴(yán)重影響動物的生理功能,并且容易引起手術(shù)本身相關(guān)的脊髓額外損傷,其應(yīng)用受到一定的限制。而經(jīng)皮置管術(shù)具有更高的手術(shù)成功率,而且創(chuàng)傷較小,僅引起輕度的腦脊液漏、很弱的感覺運(yùn)動障礙以及腰髓背側(cè)極輕微的組織病理學(xué)改變,其給藥定位也較準(zhǔn)確。
結(jié)論:實驗結(jié)果表明,相比于重復(fù)穿刺與椎板切除
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