草地早熟禾轉(zhuǎn)錄因子基因PpNAC的克隆和表達(dá)分析.pdf

1、草地早熟禾（Poa pratensis L.）是禾本科早熟禾屬植物，廣泛分布于北溫帶冷涼濕潤(rùn)地區(qū)，是一種多年生冷季型禾草，其葉形美觀，具匍匐根狀莖，既是一種牧草，也是一種優(yōu)良的草坪草。草地早熟禾喜冷涼濕潤(rùn)的氣候，耐寒性較強(qiáng)，但不耐干旱，尤在高溫高濕條件下易感病。NAC蛋白是植物特有的一類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子，在植物的生長(zhǎng)發(fā)育、器官建成、激素調(diào)節(jié)和防御抵抗多種生物和非生物脅迫等方面發(fā)揮著重要作用。因此，本文采用 RACE技術(shù)從草地早熟禾中克隆 NAC

2、類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因，并對(duì)其功能進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下：
　　(1)以200mM NaCl處理的草地早熟禾葉片為材料制備cDNA，采用RACE技術(shù)克隆得到1個(gè)NAC基因，其片段總長(zhǎng)分別為1147bp，包括完整開(kāi)放閱讀框837bp，預(yù)測(cè)編碼長(zhǎng)度為278個(gè)氨基酸的多肽鏈，分子量31.43 kD。核苷酸序列比對(duì)結(jié)果表明該基因編碼的蛋白屬于NAC轉(zhuǎn)錄因子家族，命名為PpNAC。
　　(2)構(gòu)建了pBI-PpNAC-GFP熒光表達(dá)載體，并

3、轉(zhuǎn)化洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞，瞬時(shí)表達(dá)結(jié)果顯示，PpNAC主要定位于細(xì)胞核。
　　(3)以DIG標(biāo)記的PpNAC cDNA作為探針，進(jìn)行Southern Blot，證明PpNAC在草地早熟禾基因組中只有一個(gè)拷貝。
　　(4)以eEF-1α作為內(nèi)參，對(duì)不同逆境條件下，草地早熟禾PpNAC的表達(dá)進(jìn)行Real-time PCR檢測(cè)。結(jié)果表明，PpNAC的表達(dá)顯著受到4℃低溫、37℃高溫、NaCl、ABA、SA的促進(jìn)，而受到PEG、MeJA