中國(guó)水仙MYB轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、中國(guó)水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)是多年生草本植物，石蒜科水仙屬，為我國(guó)的傳統(tǒng)名花之一，但是其花色單一、品種匱乏，限制了水仙產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。目前對(duì)中國(guó)水仙花色形成機(jī)理的研究尚不深入，其呈色的分子機(jī)理還不明確。MYB類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子在植物花色素形成過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控功能，現(xiàn)在大部分的研究成果都是轉(zhuǎn)錄激活子的應(yīng)用，這在許多植物中都得到廣泛的驗(yàn)證，然而對(duì)于花青素合成過(guò)程中存在的具有抑制作用的MYB轉(zhuǎn)錄因子的研

2、究卻很少。本研究以‘金盞銀臺(tái)’為材料，利用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆出可能對(duì)其花色形成有調(diào)控作用的 MYB基因，通過(guò)熒光定量 PCR技術(shù)分析其在中國(guó)水仙成花過(guò)程中的不同時(shí)期的相對(duì)表達(dá)水平，并對(duì)其構(gòu)建反義表達(dá)載體，農(nóng)桿菌介導(dǎo)入水仙受體系統(tǒng)，進(jìn)行相關(guān)的表達(dá)研究。研究結(jié)果對(duì)中國(guó)水仙的花色改良探索具有一定意義。主要研究結(jié)果如下：
　　1.利用同源克隆技術(shù)從中國(guó)水仙‘金盞銀臺(tái)’花瓣中克隆得到4條MYB基因，序列分析表明，MYB1基因全長(zhǎng)

3、842bp，其中開(kāi)放閱讀框共有681bp，編碼226個(gè)氨基酸，命名為NtMYB1，在Gengbank中的登錄號(hào)為KC763973；MYB2基因全長(zhǎng)1067bp，其中開(kāi)放閱讀框共有633bp，編碼210個(gè)氨基酸，命名為NtMYB2，在GeneBank中的登錄號(hào)為KC763974；MYB3基因全長(zhǎng)805bp，其中開(kāi)放閱讀框共有606bp，編碼201個(gè)氨基酸，命名為NtMYB3，在GeneBank中的登錄號(hào)為KC763975；MYB4基因全長(zhǎng)

4、1182bp，其中開(kāi)放閱讀框共有855bp，編碼284個(gè)氨基酸，命名為NtMYB4，在GeneBank中的登錄號(hào)為KC763976。
　　2.以中國(guó)水仙 Actin基因?yàn)閮?nèi)參基因，通過(guò)熒光定量轉(zhuǎn)錄表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，4個(gè)MYB基因在中國(guó)水仙成花過(guò)程中的表達(dá)水平均有明顯差異。除了花苞期表達(dá)量很低，NtMYB1基因在其他5個(gè)時(shí)期的表達(dá)量都很高，且呈現(xiàn)逐步下降的趨勢(shì)；NtMYB2基因的表達(dá)水平隨著花形成的時(shí)間推移而下降，且在盛花期、開(kāi)花后期和