組織工程方法修復(fù)關(guān)節(jié)骨軟骨缺損的實驗研究.pdf

1、[目的] 研究異體軟骨細(xì)胞傳代培養(yǎng)后作為種子細(xì)胞與脫細(xì)胞骨軟骨支架及海綿狀聚己內(nèi)酯與左旋聚乳酸共聚物(PCL-b-PLLA)材料復(fù)合構(gòu)成組織工程材料移植對兔膝關(guān)節(jié)骨軟骨缺損的修復(fù)作用。 [方法] 1取1月齡新西蘭大白兔膝關(guān)節(jié)透明軟骨，用二步酶法消化獲取原代軟骨細(xì)胞，測定細(xì)胞活力，傳代培養(yǎng)，繪制細(xì)胞生長曲線，擴(kuò)增至第3代，作為種子細(xì)胞。 2脫細(xì)胞骨軟骨支架的制備：于3月齡新西蘭大白兔膝關(guān)節(jié)取4mm×4mm×

2、3mm(長×寬×深)大小的骨軟骨基質(zhì)，采用改良的去垢劑．酶法，進(jìn)行脫細(xì)胞脫鈣處理，超純水沖洗，凍干機(jī)凍干，環(huán)氧乙烷滅菌處理，作為支架備用。 3聚己內(nèi)酯與左旋聚乳酸共聚物(PCL-b-PLLA)支架的制備：采用鹽析法制備支架，凍干機(jī)凍干備用。 4支架的細(xì)胞相容性測定及軟骨細(xì)胞與支架的體外復(fù)合：細(xì)胞增殖度法測定兩種支架(脫細(xì)胞骨軟骨支架及PCL-b-PLLA支架)的細(xì)胞相容性：取脫細(xì)胞骨軟骨支架和PCL-b-PLLA支架，與

3、軟骨細(xì)胞5×10<'7>/ml密度復(fù)合，構(gòu)成脫細(xì)胞骨軟骨支架軟骨細(xì)胞復(fù)合體和PCL-b-PLLA支架軟骨細(xì)胞復(fù)合體，均行電鏡觀察，合格批次備用移植。 5動物實驗：行兔膝關(guān)節(jié)正中切口，于髕骨內(nèi)側(cè)入膝關(guān)節(jié)，暴露股骨的髕股關(guān)節(jié)面，造成4mm×4mm×3mm(長×寬×深)大小的缺損，分為曠置空白對照組、PCL-b-PLLA支架組，PCL-b-PLLA復(fù)合異體軟骨細(xì)胞支架組，脫細(xì)胞骨軟骨支架組，脫細(xì)胞骨軟骨支架復(fù)合異體軟骨細(xì)胞支架組五組，

4、每組12只，分別于2W，1M，3M取材，進(jìn)行大體觀察，病理染色(HE染色，番紅O染色)觀察，參照Pineda標(biāo)準(zhǔn)對新生組織評分，評價缺損修復(fù)情況。 [結(jié)果]1獲取的原代軟骨細(xì)胞活性良好，活性率95﹪以上，傳代培養(yǎng)，不同代的軟骨細(xì)胞表現(xiàn)不同的生長曲線。 2脫細(xì)胞骨軟骨支架呈半透明色，彈性良好，病理染色示：細(xì)胞成分已完全祛除，保留了纖維支架。 3兩種材料(脫細(xì)胞骨軟骨支架和PCL-b-PLLA支架)的細(xì)胞相容性良好：體外復(fù)合

5、實驗中，軟骨細(xì)胞可貼附于材料上，生長，增殖，并分泌細(xì)胞外基質(zhì)。 4動物實驗結(jié)果：脫細(xì)胞骨軟骨支架組及脫細(xì)胞骨軟骨復(fù)合異體軟骨細(xì)胞支架組于1M及3M時為透明軟骨修復(fù)，以脫細(xì)胞骨軟骨復(fù)合軟骨細(xì)胞支架組修復(fù)效果最佳；空白對照組為纖維軟骨修復(fù)；有機(jī)材料組(PCL-b-PLLA組及復(fù)合異體軟骨細(xì)胞組)于3M時材料崩解，新生組織始終未能完全填充缺損。 [結(jié)論] 1二步酶法可獲取活力較高的原代軟骨細(xì)胞，傳代培養(yǎng)可擴(kuò)增至需要的軟