Oligopainting在水稻染色體識(shí)別中的應(yīng)用.pdf

1、染色體涂染技術(shù)即將整條染色體、某條染色體臂（長(zhǎng)臂或短臂）或者染色體某個(gè)片段的DNA制備成探針，通過(guò)熒光原位雜交(FISH)的方法，將探針雜交到染色體上，從而分析和研究染色體的重組、畸變和同源基因。本研究中，我們以水稻為供試材料，通過(guò)生物信息學(xué)篩選出了日本晴第9號(hào)染色體上25000個(gè)的寡核苷酸構(gòu)建成文庫(kù)，并將其標(biāo)記為寡核苷酸探針(oligo probe)。通過(guò)FISH方法，觀察了日本晴、Chr11L·9L易位系、2個(gè)涉及第9號(hào)染色體的非整

2、倍體材料以及基因組為AAC的異源三倍體材料中有絲分裂及減數(shù)分裂過(guò)程中第九號(hào)染色體，揭示了oligopainting在水稻中的應(yīng)用價(jià)值，主要研究結(jié)果如下:
　　1、在本研究中，我們?cè)O(shè)計(jì)了能夠覆蓋于日本晴第9號(hào)染色體0-23Mb的寡核苷酸文庫(kù)，包含25000個(gè)寡核苷酸，每個(gè)寡核苷酸包含45個(gè)堿基，然后經(jīng)過(guò)乳化PCR擴(kuò)增、轉(zhuǎn)錄、反轉(zhuǎn)錄等步驟標(biāo)記為第9號(hào)染色體寡核苷酸探針(oligo-chr9)。
　　2、oligo-chr9能夠清

3、晰準(zhǔn)確地與日本晴有絲分裂和減數(shù)分裂細(xì)胞中的第9號(hào)染色體雜交，并且能夠追蹤第9號(hào)染色體在分裂過(guò)程各個(gè)時(shí)期的形態(tài)變化。結(jié)果顯示，該寡核苷酸探針可以應(yīng)用于水稻細(xì)胞學(xué)的相關(guān)研究。
　　3、在本研究中，運(yùn)用oligo-chr9對(duì)一個(gè)已知的Chr11L·9L易位系進(jìn)行驗(yàn)證，探究基于寡核苷酸探針的涂染技術(shù)在染色體結(jié)構(gòu)變異方面的應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果顯示，在該易位系中，oligo-chr9探針能夠分別與兩對(duì)染色體的長(zhǎng)臂和短臂進(jìn)行特異雜交，并且結(jié)合Cent

4、O探針和5S rDNA探針，說(shuō)明第9號(hào)染色體著絲粒區(qū)域發(fā)生不均等斷裂，11號(hào)染色體在5S rDNA區(qū)域發(fā)生斷裂，形成了兩對(duì)新染色體，Chr11L·9L和Chr9S·11S，驗(yàn)證了之前的研究結(jié)果，同時(shí)說(shuō)明該oligo-chr9探針可以應(yīng)用于秈稻品種。
　　4、利用oligo-chr9探針對(duì)本實(shí)驗(yàn)室若干染色體數(shù)目異常的水稻材料進(jìn)行鑒定，最終鑒定出有兩個(gè)與第9號(hào)染色體有關(guān)的非整倍體材料，Y6077和Y6089。兩者均呈第9號(hào)染色體增多的

5、現(xiàn)象。其中Y6077為增加1條小染色體，由2個(gè)第9號(hào)染色體短臂所組成的等臂染色體，但其中一個(gè)短臂末端的45S rDNA區(qū)域缺失。Y6089增加了4條染色體，其中兩條為第9號(hào)染色體短臂形成的等臂染色體，但這2條染色體的著絲粒片段大小不一。
　　5、在基因組為AAC的異源三倍體材料中，我們運(yùn)用oligo-chr9探針與該材料的根尖細(xì)胞染色體做熒光原位雜交，結(jié)果顯示第9號(hào)染色體在A組和C組中具有同源性，是相對(duì)保守的。運(yùn)用oligo-ch