Cystamine對全腦缺血大鼠海馬神經元凋亡相關蛋白核磷蛋白表達的研究.pdf

1、目的：①研究大鼠全腦缺血再灌注模型不同時間點凋亡相關蛋白核磷蛋白(NPM)在海馬的表達；②缺血再灌注后應用Cystamine(CYS)對核磷蛋白表達水平的影響；③從而探討全腦缺血時Cystamine保護腦組織的可能機制。
　　 材料和方法采用4血管阻斷法制作大鼠全腦缺血模型，腦電圖驗證成功與否。78只成年雄性SD大鼠（模型成功率75％，死亡后補充動物），體重280-320g，隨機分為假手術組(sham)、全腦缺血組(GI)、全腦

2、缺血+Cystamine治療組(GI+CYS)3組，其中Sham組6只，GI組、GI+CYS組各36只。GI組和GI+CYS組各按照再灌注后6小時、12小時、1天、3天、5天和7天隨機分為6亞組，每亞組6只大鼠。其中GI+CYS組于雙側頸總動脈夾閉I0分鐘后立即給予CYS(150mg/kg)腹腔注射，缺血時間在24小時內的只在缺血后給予一次CYS(150mg/kg)腹腔注射，超過1天的每天在初次注射的相應時間點再各給予CYS(150mg

3、/kg/day)腹腔注射。Sham組僅暴露兩側椎動脈及頸總動脈，不予電凝及夾閉，每天給予生理鹽水Iml腹腔注射，于第3天處死。GI組每天給予等劑量生理鹽水腹腔注射。將GI組和GI+CYS組大鼠分別在相應時間點，麻醉后斷頭取腦的海馬組織。
　　 蛋白免疫印跡方法檢測再灌注后不同時間點海馬核磷蛋白表達水平的變化。使用ImageJ分析電泳條帶灰度比。
　　 所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差(x±s)的形式表示，數(shù)據(jù)用SPSS11.5

4、軟件包做統(tǒng)計分析，檢驗水準a=0.05。
　　 結果蛋白免疫印跡(WESTERN BLOT)：應用抗NPM的抗體對經SDS-PAGE并轉膜的樣品進行免疫檢測，應用化學發(fā)光法(ECL)進行顯色后在分子量37kD附近得到1條單一蛋白條帶。Sham組海馬有一定數(shù)量的NPM表達；GI組再灌注6小時后，海馬NPM的表達較Sham組減弱，12小時后海馬NPM表達增加，1天達高峰，后逐漸下降，3天、5天保持較高的水平；GI組與Sham組比較其

5、1天、3天、5天亞組的NPM表達均明顯升高，NPM條帶相對較深，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)：GI+CYS組再灌注6小時后，NPM表達水平即開始升高，12小時后NPM的表達開始明顯增加，也在1天達高峰，后雖呈下降趨勢，但再灌注7天仍維持在較高水平；仍高于假手術組；與GI組相比，1天、3天、5天、7天亞組NPM的表達顯著升高，NPM條帶較深，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，12小時亞組NPM的表達水平略高于GI組，NPM條帶相對較深，計