轉(zhuǎn)il-4基因番茄(Lycopersicon esculentum)及其雜交后代的il-4遺傳與表達(dá)研究.pdf

1、本文對(duì)轉(zhuǎn)il-4基因番茄的T5、T6代及雜交F1代植株進(jìn)行了出苗率統(tǒng)計(jì)、PPT抗性篩選、PCR檢測(cè)、PCR-southern、轉(zhuǎn)基因植株田間表現(xiàn)調(diào)查及不同株系間的植株進(jìn)行人工雜交，對(duì)雜交F1代植株及親本自交后代植株進(jìn)行ELISA檢測(cè)及Western雜交，探究il-4基因在高世代轉(zhuǎn)基因番茄中的遺傳規(guī)律及目的蛋白表達(dá)量的差異，試獲得il-4基因遺傳穩(wěn)定且表達(dá)量高的株系。
　　本實(shí)驗(yàn)播種T4代種子1639粒，得到1060株 T5代轉(zhuǎn)基因

2、植株，其中有532株表現(xiàn)為PPT抗性，僅有3株后代符合抗性植株：非抗性植株=3:1的孟德?tīng)柗蛛x規(guī)律；il-4基因PCR擴(kuò)增的陽(yáng)性率為4.15％。播種T5代種子2090粒，得到1015株T6代轉(zhuǎn)基因植株，其中485株表現(xiàn)為PPT抗性，僅有1株后代符合抗性植株:非抗性植株=3:1的孟德?tīng)柗蛛x規(guī)律，其余植株并不符合孟德?tīng)柗蛛x規(guī)律；il-4基因PCR擴(kuò)增的陽(yáng)性率為5.32%。在T6代非PPT抗性篩選植株中，il-4基因PCR擴(kuò)增的陽(yáng)性率為9.2

3、7%。播種轉(zhuǎn)il-4植株的雜交種187粒，得到117株F1代轉(zhuǎn)基因植株，il-4基因PCR擴(kuò)增的陽(yáng)性率為7.96%。PCR-southern雜交結(jié)果表明，il-4基因已整合到番茄基因組中，且在轉(zhuǎn)基因后代植株中仍然存在。對(duì)T6代轉(zhuǎn)基因植株與非轉(zhuǎn)基因植株的田間表現(xiàn)型的遺傳分析表明，株高和單株結(jié)果數(shù)差異極顯著，雜交F1代與親本自交后代的T6代植株相比，多數(shù)植株單株結(jié)果數(shù)及單果種子數(shù)減少，但有少數(shù)植株出現(xiàn)雜種優(yōu)勢(shì)，表現(xiàn)為生長(zhǎng)勢(shì)、結(jié)果性增強(qiáng)。

4、r>　　在親本自交后代的T6代44株P(guān)CR陽(yáng)性植株中，ELISA陽(yáng)性植株有16株，占檢測(cè)總量的36.36%。IL-4表達(dá)量為32.49-352.51ng/FW占總可溶蛋白的0.03%-0.25%。在轉(zhuǎn)基因植株的不同株系間，IL-4表達(dá)量存在差異表達(dá)。在F1代的9株P(guān)CR陽(yáng)性植株中，共有8株為ELISA陽(yáng)性，占檢測(cè)總量的89%。IL-4表達(dá)量為26.46-643.85ng/FW，占總可溶蛋白的0.02%-0.51%。在3個(gè)雜交組合中，2個(gè)