白介素6基因序列單核苷酸多態(tài)與京海黃雞柔嫩艾美爾球蟲抗性的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、本研究以京海黃雞為實驗材料，采用實時熒光定量法PCR法檢測IL-6、IL-8(CXCLi2)、CCLi2基因在雞柔嫩艾美爾球蟲攻毒和非攻毒群體間的組織表達(dá)譜差異，研究3個基因在球蟲感染中所起作用。進(jìn)一步通過DNA測序技術(shù)，檢測炎性細(xì)胞因子IL-6（白介素6）基因上游-2200bp至下游500bp區(qū)域中的單核苷酸多態(tài)(single nucleotidepolymorphism，SNP)，并分析所測SNPs及其單倍型與京海黃雞柔嫩艾美爾球蟲

2、抗性指標(biāo)之間的關(guān)系，為京海黃雞抗病育種提供分子遺傳標(biāo)記。主要研究結(jié)果如下:
　　1、IL-6基因在各組織中均有表達(dá)，感染組IL-6基因在盲腸、胸腺、腎臟中表達(dá)量極顯著高于對(P＜0.01)，在法氏囊中表達(dá)量顯著高于對照組(P＜0.05);IL-8基因在各組織中均有表達(dá)，在腺胃、盲腸和胸腺中表達(dá)量極顯著的高于對照組(P＜0.01)，在脾和小腸中表達(dá)量顯著高于對照組(P＜0.05);CCLi2在各組織中均有表達(dá)，感染組在脾和胸腺中表達(dá)

3、量極顯著高于對照組(P＜0.01)，在腺胃、盲腸、腎臟中顯著高于對照組(P＜0.05)。
　　2、以IL-6為候選基因測序共發(fā)現(xiàn)了28個突變位點，與GenBank上進(jìn)行比較，新發(fā)現(xiàn)了4個突變位點。其中位于5'調(diào)控區(qū)的單核苷酸突變有19個，除去GenBank有記錄的SNPs，新發(fā)現(xiàn)3處突變;位于內(nèi)含子的SNPs有2個;位于外顯子的SNPs有2個，均為同義突變;位于3'區(qū)的SNPs有5個。
　　3、本試驗對京海黃雞IL-6基因2

4、8個SNPs位點與抗性指標(biāo)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)其中有13個位點與抗性指標(biāo)有關(guān)聯(lián)。其中與丙二醛(Malondialdehyde，MDA)有顯著關(guān)聯(lián)的SNPs有3個，分別為1、6、25號變異位點;與白介素2有顯著關(guān)聯(lián)的SNPs有6個，分別是7、12、16、17、20、21號變異位點;與谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-Px)有關(guān)聯(lián)的SNPs有3個，分別是12、15、17位點;14號位點SNP與一氧化氮有

5、顯著關(guān)聯(lián);與白介素17有顯著關(guān)聯(lián)的SNPs位點是17和19;與過氧化氫酶(Catalase，CAT)有顯著關(guān)聯(lián)的SNPs位點為19和28;19號位點與白介素16有顯著相關(guān)。
　　4、對5'調(diào)控區(qū)與抗性指標(biāo)有關(guān)的9個SNPs位點進(jìn)行單倍型分析:H2H3單倍型組合IL-17的濃度顯著高于其他單倍型組合的濃度(P＜0.05); H2H5單倍型組合GSH-Px濃度顯著高于H1H1、H1H2和H1H5單倍型組合(P＜0.05);H1H2、H

6、1H4、H2H5單倍型組合MDA濃度顯著的高于單倍型組合H1H1、H1H5、H2H3(P＜0.05);單倍型組合H2H5IL-2濃度顯著的高于單倍型組合H1H1、H1H2和H1H5。對內(nèi)含子和3'端與抗性指標(biāo)有關(guān)的4個SNPs位點進(jìn)行單倍型分析:H2'H3'單倍型組合的NO濃度顯著的低于H1'H3'單倍型組合(P＜0.05)，CAT濃度顯著的低于H2'H2'單倍型組合(P＜0.05);H2'H2'單倍型組合超氧化物歧化酶(Superox