偏頭痛相關microRNA表達譜及靶向Il-1β的microRNA篩選研究.pdf

1、背景:偏頭痛是一種常見的神經血管紊亂疾病，其患病率約為10％-20％左右，為社會帶來嚴重的經濟負擔。其發(fā)病機制還不十分清楚。三叉神經血管反射學說以及細胞因子介導的硬腦膜無菌炎癥反應是頭痛的主要學說。白細胞介素1β(interleukin-1 beta，IL-1β)在偏頭痛大鼠三叉神經節(jié)(trigeminal ganglia，TG)中、在偏頭痛患者的外周靜脈血和頸靜脈血中表達的升高，說明其可能參與偏頭痛的發(fā)病機制，但是其具體作用機制尤其是

2、分子機制還未知。微小RNA(microRNA，miRNA)是一類長度約為18-25個核苷酸的小單鏈RNA分子，在轉錄后水平通過降解mRNA或抑制其表達來誘導基因沉默，miRNA參與多種生物過程如細胞分化和凋亡，以及多種疾病過程如腫瘤、神經病理性疼痛和心血管疾病。但目前鮮有偏頭痛相關miRNA的報道。
　　目的:探索miRNA在偏頭痛大鼠TG和正常大鼠TG中的表達差異。并在這些差異表達的microRNA中初步篩選靶作用于IL-1β的

3、miRNA，探討IL-1β在偏頭痛發(fā)病過程中的分子機制，為防治偏頭痛尋找新的生物學標記物及治療靶點。
　　方法:應用化學物質重復刺激大鼠硬腦膜，誘導炎癥，建立偏頭痛大鼠模型。選取雄性Sprague Dawley(SD)大鼠34只，體重約為160-220g，隨機分為假手術組和致炎劑(inflammation soup，IS)1d組、2d組和3d組。大鼠行硬腦膜外置管術。恢復5天后，IS組分別硬腦膜給予IS10μl/d，假手術組只行矢

4、狀竇旁硬腦膜下置管術，余實驗操作同IS組。Western blot檢測各組大鼠TG中IL-1β的表達情況。提取假手術組及IS3d組大鼠TG的RNA進行miRNA芯片檢測;四種不同的生物信息學軟件預測靶作用IL-1β基因3'UTR區(qū)的miRNA，結合芯片結果取交集。篩選5個交集中的miRNA和3個上調的miRNA和進行實時定量聚合酶鏈反應(quantitative real time polymerase chain reaction，q

5、RT-PCR)驗證。
　　結果:硬腦膜下置管術后5d，大鼠眶周痛閾與術前比無差異(P＞0.05)，硬腦膜給予IS3d后，大鼠眶周痛閾明顯下降(P＜0.05)。與假手術組比，IS2d和IS3d組大鼠TG中IL-1β表達是升高的。IS3d組與假手術組芯片結果比較共有23個差異表達的miRNA（倍數(shù)＞1.5），其中上調的有17個，下調的有6個。qRT-PCR結果顯示1個上調的miRNA: miR-3560及2個下調的miRNA:miR-