兒童孤獨(dú)癥的高危因素及早期特征、血漿谷氨酸和γ-氨基丁酸濃度、Reelin基因多態(tài)性的研究.pdf

1、目的: (1)研究?jī)和陋?dú)癥發(fā)病的高危因素及孤獨(dú)癥兒童的早期發(fā)育特征。 (2)研究血漿谷氨酸和γ-氨基丁酸濃度變化與兒童孤獨(dú)癥的關(guān)系，及其在兒童孤獨(dú)癥易發(fā)癲癇病理機(jī)制中的作用。 (3)通過(guò)對(duì)Reelin基因上四個(gè)單核苷酸多態(tài)(SNP)位點(diǎn)rs736707、rs2229864、rs362691、rs2073559的檢測(cè)，探討Reelin基因多態(tài)性與兒童孤獨(dú)癥的關(guān)系。 方法: (1)共入組兒童孤獨(dú)癥核

2、心家系278例及正常對(duì)照兒童核心家系200例，調(diào)查一般人口學(xué)資料、母孕期情況、圍產(chǎn)期情況、發(fā)育性標(biāo)志出現(xiàn)時(shí)間、養(yǎng)育情況、既往史、家族史及體格檢查情況；對(duì)于孤獨(dú)癥兒童，尚需調(diào)查早期癥狀表現(xiàn)、評(píng)定兒童孤獨(dú)癥評(píng)定量表(CARS)及孤獨(dú)癥行為檢查量表(ABC)。 (2)27例伴癲癇的孤獨(dú)癥患者作為觀察組，30例不伴癲癇的孤獨(dú)癥患者為另一觀察組，36例正常兒童作為對(duì)照組。采用高效液相色譜法測(cè)定三組血漿谷氨酸和γ-氨基丁酸濃度，進(jìn)行組間比較

3、。 (3)在中國(guó)漢族孤獨(dú)癥核心家系(孤獨(dú)癥患者234人，父母399人)及正常對(duì)照人群(286人)中，檢測(cè)Reelin基因上四個(gè)單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)rs736707、rs2229864、rs362691、rs2073559，采用TaqMan-PCR的方法確定樣本各位點(diǎn)的基因型，進(jìn)行以核心家系為基礎(chǔ)的傳遞不平衡檢驗(yàn)及病例對(duì)照的關(guān)聯(lián)研究。 (4)采用DNA測(cè)序和序列分析的方法，驗(yàn)證TaqMan-PCR等位基因鑒別分析技術(shù)的準(zhǔn)確性。

4、 (5)使用GENEHUNTER(version2.1)軟件對(duì)孤獨(dú)癥核心家系進(jìn)行傳遞不平衡分析，使用SAS軟件包構(gòu)建單倍體模型，以x2檢驗(yàn)比較組間差異。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS14.0軟件包，根據(jù)資料特征分別進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、x2檢驗(yàn)、方差分析、Logistic回歸分析以及計(jì)算暴露因素的優(yōu)勢(shì)比(OR值)。 結(jié)果: (1)兒童孤獨(dú)癥先證者中男性233人，女性45人，男女比例為5.18:1；患者起病年齡為22.36±8

5、.29月。家長(zhǎng)感覺(jué)到孩子異常最早是在10個(gè)月時(shí)，最晚在48個(gè)月。 (2)與正常兒童相比，孤獨(dú)癥患者的多項(xiàng)圍產(chǎn)期和母孕期高危因素差異具有顯著性。Logistic回歸發(fā)現(xiàn)：母親受教育年限(P=0.009)、父親生育年齡(P=0.001)、家庭負(fù)擔(dān)(P=0.001)、撫育者(P=0.001)、妊娠反應(yīng)、孕期服藥史、分娩方式、養(yǎng)育方式、主要教導(dǎo)者、陽(yáng)性家族史(P=0.002)進(jìn)入回歸方程。 (3)計(jì)算回歸方程中有臨床意義的6項(xiàng)指

6、標(biāo)的組間優(yōu)勢(shì)比(OR值)，從強(qiáng)到弱依次為父親生育年齡>30歲(OR=6.715)、家族史陽(yáng)性(OR=5.798)、孕期服用藥物(OR=4.653)、非自然分娩(OR=4.147)、母親受教育年限>11年(OR=1.373)、妊娠反應(yīng)中/重度(OR=1.044)。 (4)與對(duì)照組兒童相比，孤獨(dú)癥兒童的各項(xiàng)發(fā)育性標(biāo)志出現(xiàn)時(shí)間、孤獨(dú)癥早期表現(xiàn)總分、頭圍等指標(biāo)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (5)不伴癲癇的孤獨(dú)癥組(A組)血漿谷氨酸濃度

7、為653.95±545.87pmol/L，伴有癲癇的孤獨(dú)癥組(B組)血漿谷氨酸濃度為1608.81±1478.22pmol/L，正常對(duì)照兒童(C組)血漿谷氨酸濃度為653.70±589.86pmol/L。A組與B組相比，差異具有顯著性；B組與C組相比，差異具有顯著性；A組與C組相比，無(wú)顯著性差異。A組血漿γ-氨基丁酸濃度為71.46±65.98pmol/L，B組為111.19±85.27pmol/L，C組為70.13±51.36pmol

8、/L。A組與B組相比，差異具有顯著性；B組與C組相比，差異具有顯著性；A組與C組相比，無(wú)顯著性差異。 (6)孤獨(dú)癥核心家系單位點(diǎn)SNP傳遞不平衡分析，四個(gè)位點(diǎn)均無(wú)顯著性差異；四個(gè)位點(diǎn)組成的單倍體中GTCC 5條全部未傳遞，未傳遞存在顯著性差異，其余各單倍體未發(fā)現(xiàn)不平衡傳遞。 對(duì)照組樣本在四個(gè)SNPs多態(tài)位點(diǎn)上全部符合H-W平衡。病例對(duì)照關(guān)聯(lián)研究中，孤獨(dú)癥組與對(duì)照組四個(gè)SNPs多態(tài)位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較均未發(fā)現(xiàn)顯著性

9、差異。 孤獨(dú)癥組與對(duì)照組單倍體分型比較中，rs362691-rs2073559相鄰兩位點(diǎn)的CC、CT、GC三種單倍體，每一單倍體頻率在兩組之間比較，差異均無(wú)顯著性；而GT單倍體頻率在兩組之間差異具有顯著性(x2=5.805，P=0.020)。兩組單倍體頻率構(gòu)成具有顯著性差異。其余相鄰兩位點(diǎn)、三位點(diǎn)以及四個(gè)位點(diǎn)組合的每一單倍體頻率、以及單倍體頻率構(gòu)成均無(wú)顯著性差異。 結(jié)論: (1)兒童孤獨(dú)癥在母孕期、圍產(chǎn)期高危因素

10、明顯增多，前三位的高危因素分別是父親生育年齡大于30歲、家族史陽(yáng)性、孕期服用藥物史。 (2)孤獨(dú)癥兒童整體發(fā)育落后于正常對(duì)照兒童，而且在發(fā)育過(guò)程中具有某些特征性的早期表現(xiàn)，有望被早期識(shí)別。 (3)血漿谷氨酸/γ-氨基丁酸濃度異常在孤獨(dú)癥兒童中并不具有普遍性，僅在伴有癲癇的孤獨(dú)癥兒童中有異常升高。谷氨酸/γ-氨基丁酸系統(tǒng)功能異?？赡苁枪陋?dú)癥易發(fā)癲癇的病理機(jī)制之一。 (4)以孤獨(dú)癥核心家系為基礎(chǔ)的傳遞不平衡檢驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)