重型顱腦損傷后炎性因子TNF-α，IL-1β，IL-6在大鼠腦內(nèi)表達(dá)的規(guī)律及意義.pdf

1、目的： 重型顱腦損傷患者表現(xiàn)為高死亡率與高致殘率，繼發(fā)性腦損傷被認(rèn)為是患者病情加重的重要因素。當(dāng)今對(duì)重型顱腦損傷治療效果不滿意。國(guó)內(nèi)外大量研究證實(shí)炎性因子與繼發(fā)性腦損傷密切關(guān)聯(lián)。因此對(duì)炎性因子的研究成為熱點(diǎn)。最近的研究認(rèn)為腦損傷后，壞死神經(jīng)組織產(chǎn)生的炎性反應(yīng)，如促炎細(xì)胞因子的增多、氧化應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的大量自由基對(duì)腦組織產(chǎn)生毒性作用，促使神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，并在繼發(fā)性腦組織損害和功能修復(fù)中占據(jù)重要的位置。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為炎性因子的過度表達(dá)是

2、加重腦繼發(fā)損害的重要因素。有部分學(xué)者認(rèn)為炎性因子在腦損傷后參與了腦保護(hù)作用，或具有雙重作用。目前對(duì)炎性因子的具體作用與機(jī)理認(rèn)識(shí)尚存在分歧，對(duì)腦損傷后的抗炎治療存在爭(zhēng)議。有必要對(duì)此進(jìn)行進(jìn)一步研究。 炎性因子TNF-α，IL-1β，IL-6在腦損傷后的過度表達(dá)被認(rèn)為是加重腦繼發(fā)損傷的重要原因。目前對(duì)腦損傷后炎性因子的研究，主要集中于對(duì)腦脊液，血漿檢測(cè)。其是否反映了腦組織中的炎性因子變化值得質(zhì)疑。 本實(shí)驗(yàn)擬通過免疫組織化學(xué)的方

3、法對(duì)SD大鼠重型腦損傷后腦內(nèi)炎性因子TNF-α，IL-1β，IL-6進(jìn)行檢測(cè)。明確重型顱腦損傷后是否存在炎性因子過度表達(dá)；正常腦組織及交界區(qū)腦組織是否存在廣泛表達(dá)。并得出炎性因子在重型顱腦損傷后的表達(dá)規(guī)律，探討其相互作用關(guān)系，并為臨床提供可行的重型腦損傷治療方法。 材料與方法： SD大鼠70只，體質(zhì)量250～300g，由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。按隨機(jī)原則分為A、B、C、D、E、F、G7組，每組10只。用10％水合氯醛腹

4、腔注射(3ml/kg體重)，麻醉生效后，將大鼠頂枕部鼠毛剪去。常規(guī)消毒后項(xiàng)枕部中線切開頭皮，長(zhǎng)4cm，鈍性剝開軟組織、骨膜，暴露顱骨。在人字縫前3mm，顱骨中線旁3mm，鉆直徑5mm的圓形骨窗，保持硬膜完好無損。采用自由落體打擊裝置，以30g重錘從35cm高處打擊，造成重型腦損傷，記錄打擊時(shí)間，縫合頭皮飼養(yǎng)。G組動(dòng)物只行開顱手術(shù)，不做腦挫傷作為對(duì)照。對(duì)A、B、C、D、E、F組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別于手術(shù)后24h、72h、120h、1w、2w、3w

5、時(shí)間點(diǎn)取標(biāo)本。深麻醉致死后，立即開胸自左心尖插管自升主動(dòng)脈，以含4％多聚甲醛的0.1MPB(PH7.4)灌注后快速剝?nèi)∧X組織，留取臨近挫傷灶后方(臨界區(qū))及對(duì)側(cè)相應(yīng)部位(未損區(qū))大腦為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本。對(duì)照組在相應(yīng)部位進(jìn)行取材作為正常對(duì)照。4％多聚甲醛固定24小時(shí)以上，制蠟塊，石蠟切片厚約5微米。 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色SP法檢測(cè)TNF-α，IL-1β，IL-6蛋白質(zhì)在全部標(biāo)本中的表達(dá)。通過測(cè)定陽性反應(yīng)物的灰度，對(duì)免疫組織化學(xué)染色陽性反應(yīng)

6、物進(jìn)行定量檢測(cè)。 應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件包，對(duì)免疫組織化學(xué)結(jié)果以x±s表示，用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因數(shù)方差分析，SNK-q檢驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)采用p<0.05統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：TNF-α著色于胞漿中，各實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本中都有表達(dá)，對(duì)照組標(biāo)本中偶見表達(dá)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P<0.01)。B、C組表達(dá)最明顯，且二者表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)。C組，損傷側(cè)(臨界區(qū))與對(duì)側(cè)相應(yīng)部位(未損

7、區(qū))表達(dá)廣泛，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)。A、D、E、F組，臨界區(qū)比未損區(qū)表達(dá)明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P<0.05)。 IL-1β著色于胞漿中，各實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本中都有表達(dá)，對(duì)照組標(biāo)本中未見表達(dá)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P<0.01)。C組表達(dá)最明顯。 IL-6著色于胞漿中，各實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本中損傷側(cè)(臨界區(qū))都有表達(dá)，G組標(biāo)本中未見表達(dá)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P<0.01)。D組表達(dá)最明顯。對(duì)側(cè)相應(yīng)部位(未損區(qū))D、E、F有較明顯表達(dá)。A、B、C組對(duì)側(cè)相應(yīng)部

8、位(未損區(qū))有少量表達(dá)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)。 結(jié)論： 1．TNF-α在創(chuàng)傷早期就有表達(dá)，第3，5天最高，且無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)，第2，3周仍明顯高于正常。故重型顱腦損傷后存在炎性因子TNF-α的過度表達(dá)。第3周高于第2周(P<0.05)，考慮在重型顱腦損傷后的恢復(fù)期，TNF-α參與了腦損傷的修復(fù)過程。2．IL-1β在重型顱腦損傷后，腦組織廣泛表達(dá)(損傷側(cè)與對(duì)側(cè)相應(yīng)部位)，與對(duì)照相比，長(zhǎng)時(shí)間表達(dá)。故重型顱

9、腦損傷后存在炎性因子IL-1β的過度表達(dá)。 IL-1β在創(chuàng)傷后5天達(dá)最高，第2，3周也表達(dá)明顯?？紤]在重型顱腦損傷后的恢復(fù)期，IL-1β也可能參與了腦損傷的修復(fù)過程。由于第1天有表達(dá)增強(qiáng)，本實(shí)驗(yàn)不能表明TNF-α能誘導(dǎo)IL-1β的表達(dá)。3．IL-6在創(chuàng)傷1周后表達(dá)最高，第2，3周也表達(dá)明顯，表達(dá)高峰晚于。TNF-α，IL-1β表達(dá)高峰時(shí)間，TNF-α，IL-1β可能誘導(dǎo)了IL-6的表達(dá)。在創(chuàng)傷一周內(nèi)，腦組織雙側(cè)表達(dá)差異顯著，IL-6不存