納米HA-PVA多孔復合水凝膠人工角膜的組織相容性研究.pdf

1、第一部分 納米HA/PVA多孔復合水凝膠材料組織相容性的體外試驗 目的：通過體外細胞培養(yǎng)的方法，對納米羥基磷灰石(HA)/聚乙烯醇(PVA)水凝膠多孔復合物材料的細胞毒性和生物相容性進行評價，以了解該復合材料可否作為理想的人工角膜支架材料。 材料和方法：研究材料分為四組：大孔徑的納米HA/PVA復合水凝膠、小孔徑納米HA/PVA復合水凝膠、大孔徑的單純PVA水凝膠及小孔徑的單純PVA水凝膠，用四種材料100％及50％濃度

2、的浸漬液培養(yǎng)兔角膜成纖維細胞， 24h、48h、72h后通過MTT比色法檢測各試驗組及空白對照組的吸光值(OD)，并計算細胞相對增值率(RGR)，對四組材料的細胞毒性進行評分。同時通過直接接觸法，在四組材料表面培養(yǎng)兔角膜成纖維細胞，進行熒光蛋白轉染，通過倒置顯微鏡及掃描電鏡觀察各組成纖維細胞生長增殖及在材料上粘附、遷移的情況。結果：各個時間點、不同濃度的大孔徑納米HA／PVA復合水凝膠浸漬液的細胞毒性評分均為1級，相對于其余三組材料細

3、胞增殖率高，有顯著性差異(P<0.01)。兔角膜成纖維細胞能夠在納米HA／PVA多孔復合水凝膠材料表面粘附、生長繁殖，并向材料孔隙內(nèi)遷徙，其中大孔徑的復合材料比小孔徑材料更有利于細胞向孔隙內(nèi)遷徙。 結論：納米HA／PVA多孔復合水凝膠材料沒有細胞毒性，具有良好的生物相容性，有利于角膜成纖維細胞的粘附、生長及增殖，是一種具有良好臨床應用前景的新型人工角膜支架材料。第二部分納米HA／PVA多孔復合水凝膠人工角膜組織相容性的動物試驗

4、 目的：通過動物試驗來證實納米HA／PVA多孔復合水凝膠人工角膜具有良好的組織相容性，能減少植入后的并發(fā)癥，長期穩(wěn)定地存在于宿主體內(nèi)，證實其為理想的新型人工角膜材料。 材料和方法：研究材料分為三組，材料1為大孔徑的納米HA/PVA多孔復合水凝膠人工角膜，孔徑為200um；材料2為小孔徑的納米HA／PVA多孔復合水凝膠人工角膜，孔徑為100um；材料3為單純的PVA水凝膠人工角膜，孔徑為200um。三組材料光學區(qū)域直徑為4.

5、5mm，支架部分直徑2.5mm，厚度500um，曲率半徑7.8mm。選用健康新西蘭大白兔21只，隨機分為I、Ⅱ、Ⅲ組，每組七只兔，分別板層植入材料1、2、3。通過裂隙燈觀察及組織切片HE染色、免疫組化染色觀察術后3、8、12、24周人工角膜在兔角膜內(nèi)的生物學反應。結果：三組兔術后1周左右炎性反應消退，3周均可見新生血管由角膜緣上方向下生長，3-8周為生長高峰期，12周趨于穩(wěn)定，以后血管變細。 I組炎性反應輕，新生血管出現(xiàn)早，人工角膜穩(wěn)定