益腎湯對糖尿病大鼠腎組織磷酸化smad2-3表達(dá)的影響.pdf

1、目的：用鏈脲佐菌素誘發(fā)、建立糖尿病大鼠模型；觀察中藥復(fù)方益腎湯對實驗性糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用及對磷酸化smad2/3（Phosphorylated smad2/3，p-smad2/3）表達(dá)的影響，并以血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑（Angiotensin receptor blocker，ARB）纈紗坦作為對照，探討益腎湯保護(hù)糖尿病腎病的作用機制。
　　方法：成年雄性SD大鼠41只，隨機分成4組，分別為正常對照組（Control）、糖尿

2、病未治療組（DMN）、糖尿病纈紗坦治療組（ARB）、糖尿病益腎湯治療組（YST）。各糖尿病大鼠于空腹?fàn)顟B(tài)一次性腹腔內(nèi)注射2％鏈脲佐菌素誘發(fā)糖尿病模型；72小時后測定血糖，如血糖﹥16.7mmol/L，并穩(wěn)定2-3天即算建模成功。ARB組給予纈紗坦，按20mg/公斤體重/天灌胃；YST組給予相當(dāng)于生藥6.5g/公斤體重/天的濃縮藥液灌胃；Control及 DMN組按相當(dāng)劑量飲用水灌胃。前3周各組大鼠每周測量體重，根據(jù)體重調(diào)整喂藥量；3周后

3、，每天測量體重，及時調(diào)整灌胃劑量。8周后，測定每只大鼠體重；留取24小時尿液，記尿量，以放射免疫法測定尿白蛋白含量，并計算尿白蛋白排泄率；以10%水合氯醛麻醉大鼠并行心臟采血，測定血糖、血肌酐、血尿素氮等指標(biāo)；取左腎經(jīng)生理鹽水洗滌并擦干后稱重；取右腎縱形切開一半以10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，制作切片進(jìn)行免疫組化檢測smad2/3及p-smad2/3的表達(dá)、分布，并利用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析；同時行腎臟切片雪夫染色（Periodi

4、c acid-schiff stain，PAS），以PAS積分評價腎臟纖維化情況。
　　結(jié)果：大鼠成功誘發(fā)糖尿病。YST、ARB、DMN及Control組血糖（mmol/L）分別為34.3±3.9,29.8±5.1,38.3±3.9及13.0±1.1,四組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01），所有糖尿病組均顯著高于Control組。YST、ARB、DMN及Control組治療后體重（g）分別為347±16，349±30，321±17

5、，401±17，四組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.05）；組間比較Control組顯著大于DMN組（p<0.05）。顯微鏡下圖像分析顯示，YST、ARB、DMN及Control組大鼠腎臟p-smad2/3的光密度分別為77±4,70±2，188±8及49±2，四組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01），所有糖尿病組均顯著高于Control組；DMN組顯著高于YST、ARB（p<0.01）；YST與ARB組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異（p>0.05）。大鼠腎

6、臟Smad2/3在YST、ARB、DMN及Control的平均光密度分別為224±26，87±36，220±16及36±6，四組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01）；YST、ARB及DMN三者間比較無統(tǒng)計學(xué)差異（p>0.05）。腎臟切片PAS顯示，PAS積分在YST，ARB，DMN及Control組大鼠中分別為1.8±0.3,1.8±0.2,2.7±0.2及0.3±0.2，四組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01）；所有糖尿病組均顯著高于Cont

7、rol組；DMN組顯著高于YST、ARB（p<0.01）；YST與ARB組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異（p>0.05）。YST，ARB，DMN及Control組的尿白蛋白排泄率（ng/min）分別為188±39、191±35、318±25及24±2，四組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01）；所有糖尿病組均顯著高于Control組；DMN組顯著高于YST、ARB（p<0.01）；YST與ARB組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異（p>0.05）；尿白蛋白排泄率與p-s

8、mad2/3呈顯著正相關(guān)，R=0.75（p<0.01）。YST，ARB，DMN及Control組的腎臟與體重比值（mg/g）分別為4.8±0.9，4.7±0.4，5.3±0.3及3.4±0.2，四組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01），所有糖尿病組均顯著高于Control組；DMN、YST與ARB組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異（p>0.05）。各組血肌酐及尿素氮比較無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：1.糖尿病大鼠成模8周后腎臟已出現(xiàn)明顯的結(jié)構(gòu)與功能改變