藻紅蛋白亞基脂質(zhì)體的制備及對肝癌細胞光動力學(xué)作用實驗研究.pdf

1、藻紅蛋白(Phycoerythrin,PE)是廣泛存在于藍藻、紅藻、隱藻和少數(shù)一些甲藻中的一種捕光色素蛋白[1,2]。其亞基具有一定的熒光,可作為滲入細胞的標(biāo)記,而且是一種有效的抗腫瘤光敏劑,且毒副作用小。脂質(zhì)體作為藥物的載體能保護被包裹藥物,有效延長藥物作用時間,從而提高藥物的治療指數(shù)、減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性,增強藥物靶向作用,從而選擇性殺傷癌細胞[3]。因此探討將藻紅蛋白亞基包裹進脂質(zhì)體,增強藥物對病變組織的靶向性,提高

2、療效,延緩藥物的釋放是非常有意義的。
　　前期研究發(fā)現(xiàn),脂質(zhì)體的制備方法有很多,藻紅蛋白是水溶性大分子蛋白,不穩(wěn)定,其脂質(zhì)體的制備方法不同于化學(xué)小分子,為了保證制備過程中保持藻紅蛋白的生物活性,根據(jù)藻紅蛋白自身的生化特性以及后期實驗的需要,嘗試了幾種脂質(zhì)體制備方法,并對制備好的脂質(zhì)體進行了細胞光動力學(xué)實驗,主要結(jié)果如下:
　　1.經(jīng)過幾種脂質(zhì)體制備方法的嘗試,薄膜水合-超聲分散法為制備該脂質(zhì)體的最佳方法。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)過程中溫度嚴(yán)

3、格控制在40℃以下,避免劇烈實驗條件,制備的藻紅蛋白亞基脂質(zhì)體通過細胞轉(zhuǎn)染和mTT實驗證明了包裹進脂質(zhì)體中的藻紅蛋白亞基仍然保持了很好的生物活性。
　　2.根據(jù)正交實驗設(shè)計表,選取對制備脂質(zhì)體影響較大的幾個影響因素,進行正交實驗,得到了制備藻紅蛋白亞基脂質(zhì)體的最佳工藝條件。
　　3.由熒光顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察可見藻紅蛋白亞基確實包裹進入脂質(zhì)體中,且仍保有活性;由透射電鏡觀察可見,藻紅蛋白亞基脂質(zhì)體粒徑分布較均勻,外形圓整。激光粒

4、度檢測儀檢測結(jié)果顯示,藻紅蛋白亞基脂質(zhì)體粒徑分布呈單峰正態(tài),粒徑主要范圍在100～180 nm,均值為136nm?？梢娭苽涞脑寮t蛋白亞基脂質(zhì)體粒徑分布較均勻,分散性較好。
　　4.細胞學(xué)實驗證明,在相同的濃度與時間的情況下,藻紅蛋白亞基脂質(zhì)體比藻紅蛋白亞基能較快地轉(zhuǎn)入細胞,其對腫瘤細胞的殺傷效果也略高于藻紅蛋白亞基,藻紅蛋白亞基脂質(zhì)體對正常肝細胞HL7702及肝癌細胞HepG-2的轉(zhuǎn)染率有差異,且對肝癌細胞HepG-2的光動力殺傷

5、效果要明顯好于正常肝細胞HL7702.細胞凋亡實驗證明在藻紅蛋白亞基脂質(zhì)體PDT作用后的細胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè)或分離成凋亡小體,細胞膜呈泡狀膨脹,失去細胞間的連接,呈現(xiàn)出典型的凋亡細胞形態(tài)[4]。
　　結(jié)論:通過薄膜水合—超聲分散法制備的藻紅蛋白亞基脂質(zhì)體可以很好地保持藻紅蛋白亞基的熒光特性及PDT作用效果,且對正常肝細胞及肝癌細胞PDT作用效果有差異。但藻紅蛋白亞基脂質(zhì)體對藥物的緩釋性、長效性、對不穩(wěn)定藥物的保護作用