磨盤草石油醚部位抗心衰機制研究和其特征圖譜、利尿成分的分析.pdf

1、目的:探討磨盤草石油醚部位抗心衰的作用機制，并對該部位進行特征圖譜的相關(guān)研究，在此基礎(chǔ)上通過液質(zhì)和氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)進行其利尿物質(zhì)的成分分析，為后期譜效研究提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　(1)抗心衰機制實驗研究:SD大鼠隨機分為磨盤草石油醚部位高、中、低(120，60，30mg·kg-1)劑量組、地高辛組(10mg·kg-1)及正常對照組和模型對照組。采用連續(xù)4周腹腔注射異丙腎上腺素(2mg·kg-1)建立大鼠心衰模型，分組后進

2、行灌胃給藥治療，連續(xù)4周。末次給藥后進行腹主動脈采血，分離后的血清采用放射性免疫法測定心鈉肽(ANP)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(Ald)、抗利尿激素(ADH)水平，并取心臟組織稱重記錄，計算心臟重量指數(shù)，觀察各組大鼠的心肌病理形態(tài)學特征。
　　(2)特征圖譜實驗研究:采用HPLC法對十個產(chǎn)地的磨盤草藥材石油醚部位進行特征圖譜比較研究。
　　(3)利尿物質(zhì)的成分分析:SD大鼠給予磨盤草石油醚部位利尿最高劑量120mg

3、·kg-1灌胃十天后，于第11天分時間段眼眶采血，精密移取各時間段(30、60、90、120、150min)的離心血漿100μL，經(jīng)過專業(yè)的血漿處理，進行UPLC-QTOF-MS分析，與樣品和空白血漿對比，判斷吸收入血的有效成分。
　　(4)后期采用GC-MS分析方法，對磨盤草石油醚部位提取物進行成分分析。
　　結(jié)果:
　　(1)與正常對照組比較，模型對照組心臟重量指數(shù)明顯增加(P＜0.01)，及血清中ANP、AngⅡ

4、、Ald、ADH均出現(xiàn)升高(P＜0.05，P＜0.01)，心肌纖維排列紊亂，血管擴張，可見小灶性纖維瘢痕組織;與模型對照組比較，磨盤草石油醚部位各劑量組上述血清中ANP、AngⅡ、Ald和ADH指標均出現(xiàn)不同程度的降低(P＜0.05，P＜0.01)，高劑量組尤為明顯(P＜0.01)。在心臟重量指數(shù)方面，高劑量組優(yōu)于陽性對照組。心肌病理形態(tài)學特征方面，低、中劑量組相比不明顯，高劑量組有所改善。
　　(2)色譜柱:AgilentSB-

5、C18(5μm，4.6×250mm)，流動相:乙腈(D)—0.1％磷酸(B)梯度洗脫，檢測波長:205nm，流速:1.0mL/min，柱溫:30℃，進樣量:20μL，在80min內(nèi)記錄藥材的特征圖譜。
　　(3) LC-MS的色譜條件:柱子:Waters Acquity BEH C18(1.7um，2.1×100mm)，運行時間:15.00min，柱溫:35.0℃，最低壓力限制:0psi，最高壓力限制:15000 psi，流動相A

6、:0.1％磷酸，流動相B:乙腈;質(zhì)譜條件:分析儀:高分辨質(zhì)譜，毛細管(kV):2.8，進樣(V):40，初始溫度(℃):100，偏移(V):80，溶劑化溫度(℃):400，碰撞能(V):6，檢測器(V):2600。
　　(4) GC-MS的色譜條件:載氣為He(≥99.99％);流量為1.0ml·min-1;進樣口溫度為250℃;分流比為20∶1;進樣量為5μl;溶劑延遲3.0min;程序升溫:初始溫度60℃，保持3min，以5℃

7、·min-1升至200℃，再以2℃·min-1升至250℃保持3min，質(zhì)譜條件:離子源溫度230℃，四級桿150℃，質(zhì)譜接口溫度280℃，電離方式EI(70eV);質(zhì)量掃描范圍60amu～600amu。
　　結(jié)論:
　　(1)磨盤草石油醚部位可改善異丙腎上腺素所致的大鼠心衰，其機制可能于降低血清中的ANP、AngⅡ、Aid的水平相關(guān)，對心衰大鼠的心肌細胞也具有一定的改善作用，對于降低血清中的ADH作用優(yōu)于陽性對照藥，可能因

8、其本身具有利尿作用結(jié)果所致。
　　(2)十個產(chǎn)地的磨盤草藥材石油醚部位特征圖譜差距較大，但是含量較高的兩個峰各產(chǎn)地均穩(wěn)定出現(xiàn);
　　(3)結(jié)果顯示60min抽取的血漿里具有明顯的藥物入血成分，與樣品的UPLC-QTOF-MS的相比，共有5個成分吸收入血，根據(jù)國外文獻報道，將五個歸類，分別是:葡糖糖苷酸類化合物、鞘脂類化合物、十八酰胺類化合物和類似于環(huán)氧千金-二萜醇-二乙酰苯乙酰酯的化合物。
　　(4)通過GC-MS分析