磨盤草乙酸乙酯部位指紋圖譜的建立及其對(duì)肝硬化腹水大鼠的干預(yù)作用和利尿活性成分的研究.pdf

1、目的：
　　1.建立磨盤草乙酸乙酯部位指紋圖譜，為其譜效關(guān)系提供依據(jù)；
　　2.研究磨盤草乙酸乙酯部位利尿作用，并通過灌胃給藥觀察磨盤草乙酸乙酯部位對(duì)肝硬化腹水大鼠的干預(yù)作用；
　　3.通過研究磨盤草乙酸乙酯部位血中移行成分，確定利尿作用的活性成分。
　　方法：
　　1.指紋圖譜研究：采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent TC-C18（5μm，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相為甲醇-0.1％磷酸線

2、性梯度洗脫，流速為0.8mL/min；檢測(cè)波長為226 nm；柱溫為25℃。
　　2.利尿作用研究：選用SPF級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、氫氯噻嗪對(duì)照組、磨盤草乙酸乙酯部位高、中、低劑量組。分組后連續(xù)灌胃5天，末次給藥后，收集24 h尿液，測(cè)定其尿量；磨盤草乙酸乙酯部位對(duì)肝硬化腹水大鼠干預(yù)作用的研究：選用SPF級(jí)SD雄性大鼠100只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)取10只作為空白對(duì)照組，除空白組大鼠外，其余動(dòng)物給予35%苯巴比妥溶液作為

3、飲用水，1周后恢復(fù)正常飲水，并給予40%CC14-植物油背部皮下注射造模。第2周始每周皮下注射40%CC14-植物油溶液3次，每次劑量為0.2mL/100g，首劑加倍。從第十四周起，每周周末從造模動(dòng)物中隨機(jī)處死2只大鼠，將大鼠肝臟制成切片，做HE染色，直到觀察大鼠肝臟肝硬化的形成；同時(shí)再隨機(jī)抓取2只抽腹水，如有腹水抽出，即確定肝硬化腹水模型復(fù)制成功。于末次給藥后，進(jìn)行腹腔積液的測(cè)定，采血用于測(cè)定AST、ALT、ALB肝功能指標(biāo)、血清K+

4、濃度、血漿Ald水平等的測(cè)定。
　　3.利尿活性成分的研究：選用SPF級(jí)SD雄性大鼠，經(jīng)灌胃給藥，劑量為120mg/kg，1d/次，連續(xù)灌胃五天，于第四天灌胃給藥后收集24h的尿液，于第五天灌胃給藥60min后腹主動(dòng)脈取血。應(yīng)用高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)建立經(jīng)大鼠口服磨盤草乙酸乙酯部位后含藥血清樣品中成分的分析方法，通過對(duì)比空白血清、含藥血清成分異同以及空白尿液、含藥尿液成分異同，確定大鼠口服磨盤草乙酸乙酯部位后的血中移行成分。

5、
　　結(jié)果：
　　1.建立了磨盤草乙酸乙酯部位指紋圖譜共有模式，并標(biāo)定了10個(gè)共有峰，10批樣品與對(duì)照指紋圖譜相似度均在0.85以上。
　　2.磨盤草乙酸乙酯部位高、中劑量組的尿量比空白組增多（P<0.01）。
　　3.肝硬化腹水造模組的肝臟肉眼見大鼠肝臟明顯腫大，表面凹凸不平，可見大小結(jié)節(jié)，肝臟組織病理學(xué)檢查顯示假小葉的形成。
　　4.與空白組比較，模型組腹水量明顯增多（P<0.01）；與模型組比，磨盤草

6、乙酸乙酯部位高、中劑量腹水量減少（P<0.01）。
　　5.與空白組相比，模型組血清中的ALT、AST含量顯著增高（P<0.01）；與模型組相比，磨盤草乙酸乙酯部位高劑量ALT和AST均降低（P<0.05）。
　　6.與空白對(duì)照組比，陽性組血清K+含量降低（P<0.05）；各磨盤草給藥組血清K+含量與空白組比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　7.與空白組比，高劑量組、陽性組血漿中Ald降低（P<0.05）；其他組與空

7、白組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　8.十個(gè)產(chǎn)地中的血清入血移行成分差異小，其入血成分初步判定來源于磨盤草乙酸乙酯部位或是其次級(jí)代謝產(chǎn)物。
　　結(jié)論：
　　1.所建的指紋圖譜方法簡單，準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可為后續(xù)譜效關(guān)系研究提供一定的依據(jù)。
　　2.磨盤草乙酸乙酯部位具有利尿作用。
　　3.磨盤草乙酸乙酯部位各組大鼠腹腔積液量明顯減少，該藥具有消腹水作用。
　　4.磨盤草乙酸乙酯部位能降低A