江蘇宜興地區(qū)丙型肝炎病毒基因型分布和包膜區(qū)變異研究.pdf

1、本課題以江蘇省宜興市為研究現(xiàn)場，從病原學角度開展了以人群為基礎的丙型肝炎分子流行病學研究。 第一部分：江蘇宜興地區(qū)丙型肝炎病毒 基因型分布研究 HCV基因組的核苷酸序列具有高度的變異性，目前主要分為六個基因型，即1～6型。不同基因型存在明顯的地區(qū)分布差異，而且HCV的基因型對判斷丙型肝炎治療的難易程度及其預后具有重要的意義，故了解本地區(qū)HCV基因型分布特征作為進一步深入研究丙型肝炎慢性化的基礎資料有其必要性。本研

2、究采用Simmonds基因分型方法，依據(jù)HCV的保守區(qū)段5'非編碼區(qū)(5'NCR)設計1、2、3和1b型特異性引物，逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法擴增分型，并對不同基因型在人群中的分布作統(tǒng)計描述。主要結果如下：1.HCVRNA陽性檢測和基因分型研究 檢測158份抗HCV陽性血清，其中95份HCVRNA陽性，陽性率為60.1﹪，基因分型結果1b型80例(84.2﹪)，2a型5例(5.3﹪)，1b/2a型混合感染5例(5.

3、3﹪)，分型不明確者5例(5.3﹪)。2.HCV基因型在不同性別人群中的分布研究 男性丙型肝炎患者中HCV基因型以1b為主，占88.2﹪，其余為2型以及1b與2型的混合感染，分別占7.9﹪和1.5﹪；女性丙型肝炎患者中1b型占74.0﹪，未檢測到2型，而1b和2型的混合感染發(fā)現(xiàn)4例，占14.8﹪。 3.HCV基因型在急、慢性丙型肝炎和肝硬化患者中的分布研究 在HCVRNA陽性的患者中，急性丙型肝炎的HCV基因型均

4、為1b型，慢性輕度丙型肝炎患者(ALT≤200U/L)中1b和1b/2a型共占89.8﹪，慢性重度丙型肝炎患者(ALT＞200U/L)中為88.4﹪，肝硬化患者中為84.6﹪。 4.HCV基因型在有輸血史及無明確輸血史患者中的分布研究 有明確輸血史的丙型肝炎患者組與無明確輸血史患者組，基因型分布差異無統(tǒng)計學意義(P=0.414)。 5對分型產物的測序驗證工作 本研究基因分型結果為1b型的樣本測得5'NCR

5、區(qū)擴增片段序列與GENBANK上HC-J4株相應序列同源性為99.2﹪；分型結果為2型的樣本測得與GENBANK上HC-J6株相應序列同源性為97.7﹪。 第二部分：丙型肝炎病毒準種復雜性與臨床關系的研究 準種變異在丙型肝炎的慢性化中起到的作用需要深入研究和探討。本研究采用單鏈構象多態(tài)性(SSCP)方法，對44例未經干擾素治療的慢性丙型肝炎和肝硬化患者的HCV進行準種檢測。分析準種復雜性與臨床肝損害指標之間的關系，主要結

6、果如下： 1.不同臨床情況的丙型肝炎患者準種復雜性比較 ALT(≤45U/L)正常的患者組準種條帶數(shù)為2.54±1.05，ALT異常(＞45U/L)組，準種條帶數(shù)為4.48±2.14，兩組的準種條帶數(shù)比較差異有統(tǒng)計學意義(P=0.003)，說明準種在ALT異常的患者中復雜性較高。 2.影響肝損害程度的多因素Logistic回歸分析 將ALT按照正常與否作為二分類結局變量，年齡、性別、基因型、肝硬化程度、準

7、種復雜與否納入Logistic回歸模型，分析結果顯示，準種的復雜與否對ALT有顯著影響，OR值為12.884，可信區(qū)間為2.390～69.463，說明準種的復雜性是肝臟損害程度的獨立影響因素。 第三部分：1b型丙型肝炎病毒包膜區(qū)變異進化研究 本研究從1b型HCV包膜區(qū)的核苷酸序列和高變區(qū)的氨基酸序列變異入手，采用生物信息學方法構建遺傳進化樹，研究HCV的生物學特點。主要結果如下： 1.HCVE2區(qū)的核苷酸序列和HR

8、-1的氨基酸序列變異研究 測序獲得的10株HCVE2區(qū)序列經分析比對后，發(fā)現(xiàn)不同患者來源的E2區(qū)核苷酸差異較大，變異度最大的區(qū)域集中在HR-1(1491-1573nt)，但從序列的比對結果中可發(fā)現(xiàn)很多位點具有保守性，保守堿基占64.8﹪(204/315)；而HR-1的氨基酸序列比對發(fā)現(xiàn)，不同患者來源的HCV株在此區(qū)域多個固定的氨基酸位點同樣具有很好的保守性，保守的氨基酸位點占22.2﹪(6/27)。 2.系統(tǒng)進化樹分析