靈麻固本平喘湯對哮喘大鼠免疫失衡調(diào)節(jié)作用機理的實驗研究.pdf

1、目的：支氣管哮喘(簡稱哮喘，asthma)是由多種細胞(如嗜酸性粒細胞、肥大細胞、氣道上皮細胞等)和細胞成分參與的氣道慢性炎癥疾病。它是機體對抗原性或非抗原性刺激引起的一種氣管一支氣管反應(yīng)性過度增高的疾病。西醫(yī)治療哮喘方面雖然有見效快等方面的優(yōu)點，但存在藥物副作用較大、易復(fù)發(fā)等問題，而中醫(yī)在治療哮喘方面有其獨特的優(yōu)勢，因此通過應(yīng)用中西醫(yī)結(jié)合的方法治療哮喘，同時研發(fā)治療哮喘的有效方藥具有重要的意義。 根據(jù)小兒哮喘通常具有虛實夾雜的

2、病機特點，導(dǎo)師經(jīng)過多年的臨床研究，依據(jù)宣肺化痰、固本平喘的治法，自擬靈麻固本平喘湯(LM)，同時配合西藥共同治療哮喘，療效顯著。為探討本方的藥效及作用機理，進行了動物實驗。本實驗采用致敏法復(fù)制大鼠哮喘模型，通過觀察靈麻固本平喘湯對哮喘大鼠血中T淋巴細胞、免疫球蛋白及補體、腫瘤壞死因子的影響，從免疫角度探討靈麻固本平喘湯治療哮喘大鼠的作用機理，為本方的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：參照崔龍?zhí)O等哮喘大鼠模型的造模方法。將50只健康雌

3、雄各半的SD大鼠隨機分為5組：正常對照組(簡稱正常組)、模型組、靈麻固本平喘湯組(簡稱中藥組)、氨茶堿組(簡稱西藥組)、中西藥結(jié)合組(簡稱結(jié)合組)，10只/組。模型組、中藥組、西藥組、結(jié)合組分別于第1天、第5天和第8天分3次腹腔皮下注射抗原液致敏，正常組用等量的生理鹽水進行致敏。實驗第14天開始將造模后大鼠放入自制的不完全封閉的有機玻璃箱內(nèi)，予1％卵蛋白(OVA)溶液用超聲霧化器噴霧激發(fā)。正常組用等量的生理鹽水進行激發(fā)。實驗第17天開始

4、，每次霧化吸入激發(fā)前半小時給予藥物干預(yù)，中藥組和西藥組分別給予靈麻固本平喘湯的混懸液和氨茶堿懸濁液灌胃治療，結(jié)合組給予靈麻和氨茶堿混懸液灌胃治療，正常組每日給予生理鹽水灌胃。實驗第25天，在末次激發(fā)結(jié)束后12小時內(nèi)，各組大鼠斷頭取血。分別用流式細胞術(shù)檢測大鼠外周血中T細胞亞群CD4+、CD8+百分率、CD4+/CD8+比值的變化，用免疫比濁法檢測大鼠血清免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)和補體(C3、C4)，用雙抗體夾心ELISA法檢

5、測血清腫瘤壞死因子(TNF-α)。并取左肺組織固定后切片，常規(guī)HE染色制作病理切片，在光鏡下觀察各組大鼠肺組織的形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果： 1.LM對哮喘大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)的影響正常組：支氣管、肺泡組織結(jié)構(gòu)正常。 模型組：細、小支氣管的管壁和伴行動脈周圍有較多嗜酸細胞和淋巴細胞浸潤，支氣管粘膜皺壁增多延長，杯狀細胞增生明顯。 中藥組及西藥組：輕到中度炎性細胞浸潤，仍以嗜酸性粒細胞和淋巴細胞浸潤為主；支氣管粘膜

6、上皮有輕到中度損傷，杯狀細胞增生不明顯。 結(jié)合組：炎癥明顯好轉(zhuǎn)，支氣管管腔內(nèi)及血管周圍可見輕度炎性細胞浸潤，偶見少許嗜酸性粒細胞浸潤；支氣管粘膜上皮基本完整。 2.LM對哮喘大鼠外周血T細胞亞群的影響與正常組比較：模型組CD4+均明顯上升，CD8+均明顯下降，CD4+/CD8+比值顯著性上升。與模型組比較：各治療組CD4+均明顯下降，CD8+均明顯上升，CD4+/CD8+比值明顯下降，有顯著性差異。其中結(jié)合組CD4+較中

7、藥組、西藥組呈顯著性降低，CD8+呈顯著性升高，CD4+/CD8+比值呈顯著性降低。 3.LM對哮喘大鼠血清免疫球蛋白及補體的影響與正常組比較：模型組大鼠血清中IgG的含量均明顯增高，IgA、補體C3、C4的含量均明顯下降，IgM的含量無明顯變化。與模型組比較：各治療組大鼠血清中IgG的含量均顯著下降，IgA、補體C3、C4的含量均顯著上升，IgM的含量無明顯變化。其中結(jié)合組血清中IgG的含量較中藥組、西藥組呈顯著性降低；IgA

8、、補體C3、C4的含量呈顯著性升高。 4.LM對哮喘大鼠血清腫瘤壞死因子的影響與正常組比較：模型組大鼠血清中TNF-α的含量均明顯增高。與模型組比較：各治療組大鼠血清中TNF-α的含量均顯著下降。其中結(jié)合組血清中TNF-α的含量較中藥組、西藥組呈顯著性降低。 結(jié)論： 1.LM能有效調(diào)整CD4+/CD8+比值，降低IgG、TNF-α含量，升高IgA、補體水平，從而起到抗氣道炎癥和免疫調(diào)節(jié)的作用。 2.LM能