Ⅰ：5-羥色胺、5-羥色胺2A受體參與調(diào)節(jié)呼吸中樞pre-Botzinger complex的初步研究;Ⅱ：卵巢切除術(shù)后大鼠垂體前葉生長相關(guān)蛋白-43免疫反應(yīng)神經(jīng)纖維表達增加.pdf

1、本文由兩部分構(gòu)成。第一部分是關(guān)于成年大鼠5-羥色胺、5-羥色胺2A受體參與中樞呼吸調(diào)節(jié)的初步研究。第二部分是關(guān)于卵巢切除術(shù)后大鼠垂體前葉生長相關(guān)蛋白-43免疫反應(yīng)性及其與促性腺激素細胞的關(guān)系。 位于新生和成年哺乳動物延髓腹外側(cè)區(qū)的前包欽格復合體(pre-B(o)tzingercomplex，pre-B(o)tC)被認為是呼吸節(jié)律產(chǎn)生中樞。5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)作為一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，在感覺

2、和運動功能的調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其中也包括對呼吸節(jié)律的調(diào)節(jié)?；谀壳爸T多不同的電生理實驗結(jié)果而又缺乏基本的、必要的形態(tài)學實驗基礎(chǔ)，我們試圖闡明5-HT、5-HT2A受體(5-HT2Areceptor，5-HT2AR)與pre-B(o)tC神經(jīng)元之間的關(guān)系，為5-HT參與呼吸節(jié)律的調(diào)控提供形態(tài)學實驗依據(jù)。神經(jīng)激肽1受體(neurokinin-1receptor，NK1R)已經(jīng)被廣泛地用做pre-B(o)tC神經(jīng)元的特異性標記物。本實驗應(yīng)用

3、NK1R標記pre-B(o)tC神經(jīng)元，采用免疫熒光組織化學和ABC法結(jié)合免疫金-銀加強的免疫電鏡雙重標記技術(shù)，分別觀察了成年正常和慢性間斷性缺氧(chronicintermittenthypoxia，CIH)大鼠pre-B(o)tC內(nèi)5-HT、5-HT2AR與NK1R免疫反應(yīng)(immunoreactive，ir)神經(jīng)元的關(guān)系。實驗結(jié)果顯示：在正常和CIH大鼠pre-B(o)tC內(nèi)，NK1R-ir產(chǎn)物主要位于胞膜和樹突膜內(nèi)面，胞體內(nèi)也有

4、少量標記。免疫熒光雙標記顯示少部分5-HT-ir神經(jīng)纖維與NK1R-ir神經(jīng)元之間有密切接觸，電鏡下未發(fā)現(xiàn)有典型的突觸聯(lián)系。5-HT-ir終末與NK1R免疫陰性樹突之間可形成典型的非對稱性突觸。5-HT2AR免疫反應(yīng)性主要出現(xiàn)在胞體和突起，在胞膜上有明顯標記，并與NK1R-ir神經(jīng)元有密切接觸。電鏡下5-HT2AR-ir金顆粒主要分布于胞體和樹突，膜下可見較多的金顆粒標記，部分5-HT2AR-ir神經(jīng)元與NK1R共存。在CIH大鼠pre

5、-B(o)tC內(nèi)，5-HT2AR-ir金顆粒不僅僅分布在胞膜和樹突膜下，在膜外或膜的凹陷處也可發(fā)現(xiàn)陽性標記，提示缺氧狀態(tài)下5-HT2AR可能處于較正常更加活躍的功能狀態(tài)，以應(yīng)答缺氧對呼吸的調(diào)節(jié)。綜上所述，我們推測5-HT系統(tǒng)可能通過兩種途徑參與pre-B(o)tC的呼吸調(diào)節(jié)：①間接途徑：即5-HT-ir神經(jīng)纖維可能通過興奮NK1R-ir陰性的中間神經(jīng)元，后者作用于NK1R-ir神經(jīng)元以實現(xiàn)其呼吸調(diào)控作用；②直接途徑：5-HT-ir神經(jīng)纖

6、維也可能直接作用于NK1R-ir神經(jīng)元上的5-HT2AR以調(diào)節(jié)呼吸。盡管尚未發(fā)現(xiàn)5-HT-ir神經(jīng)纖維與NK1R-ir神經(jīng)元的突觸聯(lián)系，但是兩者之間的密切接觸，以及NK1R和5-HT2AR的共存關(guān)系，提示直接途徑存在的可能性，但有待于進一步實驗證實。缺氧可能進一步激活了5-HT/5-HT2AR系統(tǒng)，致使5-HT2AR處于更加活躍的功能狀態(tài)，以應(yīng)答缺氧對呼吸的干預(yù)。 哺乳動物垂體前葉存在著數(shù)量較多的P物質(zhì)(substanceP,S

7、P)、降鈣素基因相關(guān)肽(calcitoningene-relatedpeptide，CGRP)等肽能神經(jīng)纖維。這些肽能神經(jīng)纖維多分布于腺細胞間，而不是血管周，并與腺細胞形成典型的突觸結(jié)構(gòu)，為“哺乳動物垂體前葉神經(jīng)-體液雙重調(diào)節(jié)”假說提供了形態(tài)學依據(jù)。本實驗應(yīng)用免疫組化、免疫熒光雙重標記方法，觀察卵巢切除術(shù)后第4天和第15天大鼠垂體前葉GAP-43-ir神經(jīng)纖維的數(shù)量變化，及其與SP-ir神經(jīng)纖維和促性腺激素(folliclestimul

8、atinghormone，F(xiàn)SH)-ir細胞的關(guān)系，旨在明確外周內(nèi)分泌干預(yù)后，是否激發(fā)了垂體前葉神經(jīng)纖維的芽生，以及這些神經(jīng)纖維與受干預(yù)的激素分泌腺細胞以及肽能神經(jīng)纖維的關(guān)系。結(jié)果：正常大鼠垂體前葉很少有GAP-43-ir神經(jīng)纖維。卵巢切除后4d垂體前葉出現(xiàn)了數(shù)量較多的GAP-43-ir神經(jīng)纖維，術(shù)后15d神經(jīng)纖維明顯增多，多走行于腺細胞間，少量神經(jīng)纖維與FSH細胞密切接觸。GAP-43-ir神經(jīng)纖維與SP共存。由此我們得出推論，外周內(nèi)