魚藤酮對大鼠腦內(nèi)5-羥色胺能神經(jīng)體系影響及機制的實驗研究.pdf

1、帕金森病(Parkinson’sdisease，PD)是一種起病較晚的進行性神經(jīng)退行性疾病，其特征為選擇性黒質(zhì)紋狀體多巴胺能神經(jīng)元變性和含α-突觸核蛋白與泛素的胞質(zhì)內(nèi)纖維團塊形成。PD的病因還未完全清楚，但認為其與遺傳和環(huán)境因素有關(guān)。流行病學(xué)研究表明，暴露于某些環(huán)境因素如殺蟲劑，能增加PD的發(fā)生。最近的研究表明，魚藤酮是一種廣譜殺蟲劑，在動物模型身上長期全身應(yīng)用魚藤酮，可出現(xiàn)黒質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性和PD樣運動障礙癥狀。
　　 近

2、年研究發(fā)現(xiàn)PD除運動障礙以外，還常伴有抑郁、焦慮、失眠和妄想等非運動障礙的精神癥狀。抑郁是PD最常見的并發(fā)癥之一，大約40-50％的PD患者合并有抑郁癥。雖然有研究認為PD的抑郁是由于患者對這種不能治愈且使人逐漸虛弱的疾病造成的心理壓力和社會應(yīng)激所產(chǎn)生的一種反應(yīng)性和繼發(fā)性癥狀，但有更多的證據(jù)表明，PD的抑郁是由于神經(jīng)退行性變引起的。在PD合并抑郁的患者腦脊液中，5－羥色胺的代謝產(chǎn)物5－羥吲哚乙酸的下降程度與抑郁的嚴重程度呈負相關(guān)。有研究

3、表明5－羥色胺轉(zhuǎn)運體基因啟動子區(qū)的多態(tài)性與PD的抑郁相關(guān)。因此，5－羥色胺能神經(jīng)元的變性可能是PD并發(fā)抑郁的主要原因。
　　 已知多巴胺轉(zhuǎn)運體(Dopaminetransporter，DAT在PD損壞的神經(jīng)元中表達含量最高，因此認為其與PD中黒質(zhì)致密部DA能神經(jīng)元的選擇性易損性和MPTP可誘導(dǎo)出帕金森綜合癥有關(guān)。MPP+一旦進入神經(jīng)元內(nèi)，可通過單胺囊泡轉(zhuǎn)運體2(vesicularmonoaminetransporter2，VMA

4、T2)進入細胞的小囊泡內(nèi)進行潛藏。VMAT2在黑質(zhì)致密部的多巴胺胞體內(nèi)、藍斑的去甲腎上腺素胞體內(nèi)、中縫背核的5－羥色胺能胞體內(nèi)均有表達。目前的研究多支持可將VMAT2作為監(jiān)測單胺能神經(jīng)末梢生存能力的一項指標，也許針對此進行藥物干預(yù)可用于治療多種神經(jīng)變性疾病。盡管已有研究證明VMAT2能通過隔離小囊泡內(nèi)MPP+與其作用靶點的結(jié)合而降低其毒性，但是VMAT2是否對特發(fā)性PD多巴胺能神經(jīng)元及5－羥色胺能神經(jīng)元的易損性起作用還不清楚。
　

5、　 目的：通過觀察魚藤酮處理大鼠腦內(nèi)相關(guān)腦區(qū)5－羥色胺(serotonin，5-HT)、色氨酸羥化酶(tryptophanhydroxylase，TPH)和5-羥色胺轉(zhuǎn)運體(serotonintransporter，SERT)和單胺囊泡轉(zhuǎn)運體2(vesicularmonoaminetransporter2，VMAT2))的表達變化，探討其對5-HT能神經(jīng)元的影響及其機制，為研究PD發(fā)病時伴有5-HT能神經(jīng)體系的受損及機制提供直接的實驗

6、依據(jù)。
　　 方法：選用健康、成年雄性Wistar大鼠，背部皮下注射魚藤酮12周制作PD大鼠動物模型，以免疫細胞化學(xué)、免疫印記及流式細胞技術(shù)顯示大鼠腦內(nèi)相關(guān)腦區(qū)5-HT、TPH和SERT的表達變化判斷魚藤酮毒性作用；背部皮下注射魚藤酮3天觀察VMAT2的表達變化借以推測魚藤酮的作用機制。
　　 結(jié)果：
　　 魚藤酮處理12周(1)5－HT：免疫細胞化學(xué)顯示魚藤酮處理大鼠中腦中縫背核5－HT免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元數(shù)明顯

7、少于對照組(P<0.01)，魚藤酮組大鼠中縫背核和尾殼核5-HT的免疫反應(yīng)強度明顯減弱(P<0.01)；流式細胞間接免疫熒光法顯示魚藤酮組5-HT的表達量比對照組明顯降低(P<0.01)。(2)SERT：免疫細胞化學(xué)顯示魚藤酮處理大鼠尾殼核SERT免疫反應(yīng)強度明顯減弱(P<0.01)；免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn)魚藤酮處理大鼠中縫背核及尾殼核的SERT與β-actin吸光度比值與對照組相比明顯降低(P<0.05)；
　　 魚藤酮處理3天免疫