魚藤酮致帕金森大鼠腦內(nèi)mGluR1a和GLT-1表達(dá)的改變.pdf

1、帕金森病(Parkinson’s disease，PD)又名震顫麻痹(Paralysis agitans)，是一種主要發(fā)生于中年以上人群的神經(jīng)退行性疾病。其主要病理特點(diǎn)為選擇性的黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元退行性變、腦內(nèi)多巴胺含量減少及胞體內(nèi)出現(xiàn)Lewy小體等。
　　近年有研究發(fā)現(xiàn)，PD患者紋狀體中多巴胺遞質(zhì)缺乏將會導(dǎo)致基底神經(jīng)節(jié)回路中谷氨酸能神經(jīng)元活動的紊亂，同時(shí)谷氨酸能神經(jīng)通路的過度激活在PD的癥狀產(chǎn)生過程中有重要作用。谷氨酸(glut

2、amate，Glu)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)一種重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，當(dāng)它被釋放到突觸間隙后，通過與代謝型谷氨酸受體(mGluRs)結(jié)合調(diào)節(jié)突觸傳遞和神經(jīng)元的興奮性過程。谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體-1(glutamate transporters-1，GLT-1)是谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(glutamate ransporter EAATs)的一個(gè)亞型，它能逆濃度梯度從胞外向胞內(nèi)攝取谷氨酸，使胞外谷氨酸濃度保持在較低水平，EAATs的功能一旦受損，突觸間隙內(nèi)的Glu濃

3、度升高，繼而使突觸后膜神經(jīng)元興奮，甚至產(chǎn)生興奮性神經(jīng)毒性作用。目前對帕金森病的治療尚缺乏理想的治療藥物，因此，本研究通過觀察分析mGluR1α和GLT-1在PD模型腦內(nèi)的表達(dá)改變，探討mGluR1α和GLT-1在PD發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用，為尋找PD治療的新靶點(diǎn)提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。
　　流行病學(xué)顯示PD的誘因多樣而復(fù)雜，環(huán)境因素一直受到人們的關(guān)注。魚藤酮是一種被廣泛使用的殺蟲劑，為高脂溶性，極易透過生物膜和血腦屏障。能特異性的抑制線

4、粒體復(fù)合體I，造成細(xì)胞氧利用障礙。同時(shí)魚藤酮還能夠通過微管解聚機(jī)制，產(chǎn)生大量自由基，破壞神經(jīng)元的功能。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)給予魚藤酮后大鼠出現(xiàn)的癥狀和發(fā)生的病理改變，很好的模擬了人類帕金森病的特征改變。因此本實(shí)驗(yàn)選擇了帕金森病的魚藤酮大鼠模型作為研究對象。
　　目的：本研究采用魚藤酮皮下注射方法制備PD大鼠模型，觀察分析魚藤酮制備的PD大鼠腦內(nèi)mGluR1α和GLT-1的表達(dá)改變，從而為PD的研究及其治療提供新的形態(tài)學(xué)依據(jù)。

5、　　方法：選用300g左右雄性SD大鼠，隨機(jī)分為對照組，3天組，28天組，實(shí)驗(yàn)組背部皮下注射魚藤酮分別為3天和28天(1.5mg/Kg)，對照組大鼠背部皮下注射相同劑量葵花油。以免疫印跡技術(shù)檢測大鼠黑質(zhì)酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase，TH)的含量的改變，確定PD大鼠模型成功與否；以免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測大鼠腦內(nèi)尾殼核(CPu corpus striatum)和伏核(Acb accumbens)區(qū)域GLT-1和mGl

6、uR1α的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.魚藤酮的毒性作用：自注射魚藤酮第三天開始大鼠逐漸出現(xiàn)理毛動作減少致使毛色又臟又黃、并有呸毛現(xiàn)象；同時(shí)還伴有精神萎靡、自由活動減少、弓背姿勢、肢體震顫、嚴(yán)重者可有四肢行動不能尤以下肢為重；嗅覺和覓食動作減少、體重逐漸減輕等；部分大鼠還會出現(xiàn)腹瀉及口腔出血等現(xiàn)象。此階段為大鼠死亡的高發(fā)期，整個(gè)模型制備過程大鼠的死亡率為31.58％。但隨著給要時(shí)間的增長大鼠PD癥狀出現(xiàn)好轉(zhuǎn)，具體原因有待以

7、后實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步研究。
　　2.Western blot結(jié)果：與對照組相比魚藤酮組TH與β-actin條帶相對光密度比值明顯降低。魚藤酮組TH與β-actin條帶相對光密度值的比值在黑質(zhì)為0.189±0.026，比對照組減少了66.5％(P<0.01)。
　　3.免疫組化結(jié)果：
　　(1)mGluR1α免疫組化結(jié)果：魚藤酮組大鼠mGluR1α的免疫反應(yīng)強(qiáng)度降低。通過光密度值分析發(fā)現(xiàn)魚藤酮28天組大鼠CPu的DM、VM、V

8、L、DL部位的mGluR1α免疫反應(yīng)染色平均光密度值比對照組分別降低了23.35％、21.93％、15.59％和43.28％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而Acb部位平均光密度值比對照組降低了4.89％，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　(2)GLT-1免疫組化結(jié)果：
　　1)魚藤酮3天組：通過光密度值分析發(fā)現(xiàn)，魚藤酮3天組DM部位GLT-1的平均光密度值比對照組降低了0.8％，VM、VL、DL部位的GLT-1平

9、均光密度值比對照組分別升高了5.9％、16.8％和14％，其中只有VL部位的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，其他部位無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但存在升高的趨勢。與對照組相比，Acb部位平均光密度值降低了7.5％，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2)魚藤酮28天組：通過光密度值分析發(fā)現(xiàn)，魚藤酮28天組CPu的DM、VM、VL、DL部位的GLT-1平均光密度值比對照組分別升高了24.39％、34.19％、41.58％和47％，差異有統(tǒng)計(jì)

10、學(xué)意義(P<0.01)。與對照組相比，Acb部位的平均光密度值升高了6.7％，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3)28天組與3天組相比，CPu的DM、VM、VL、DL部位的GLT-1平均光密度值分別升高了25.41％、26.61％、21.17％和28.95％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；Acb部位GLT-1平均光密度值升高了15.31％，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.魚藤酮具有明