水飛薊賓對(duì)D-氨基半乳糖誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷肝細(xì)胞脹亡的影響.pdf

1、背景:細(xì)胞脹亡是一種不同于細(xì)胞凋亡的另一種細(xì)胞死亡形式，可見(jiàn)于各種生理、病理過(guò)程中，其主要形態(tài)學(xué)特點(diǎn)為細(xì)胞腫脹，胞體增大，胞漿空泡化，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核腫脹，繼之胞膜起泡，結(jié)構(gòu)崩解，胞漿外溢，引發(fā)炎癥反應(yīng)。肝臟不僅是人體最大的消化腺，也是人體主要的代謝器官，它具有消化、吸收、代謝、排泄、解毒、造血、免疫等多種功能。肝損傷是多種肝臟疾病共有的一種病理狀態(tài)，其長(zhǎng)期存在往往是導(dǎo)致肝纖維化，甚至肝硬化、肝癌發(fā)生的重要始動(dòng)因素。因此防治肝損傷是臨

2、床肝病治療的主要環(huán)節(jié)之一。自上世紀(jì)90年代以來(lái)，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，對(duì)肝損傷的認(rèn)識(shí)己進(jìn)入到細(xì)胞分子學(xué)水平。肝細(xì)胞脹亡見(jiàn)于各種急慢性肝臟疾病中，是導(dǎo)致肝功能異常的重要因素。水飛薊賓(silibinin，SIL)是水飛薊素中含量最多、活性最高、藥理作用最強(qiáng)的成分，具有清除活性氧、對(duì)抗脂質(zhì)過(guò)氧化、抑制一氧化氮(NO)產(chǎn)生、抑制5’-脂氧合酶、保護(hù)肝細(xì)胞膜、促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù)、再生、免疫調(diào)節(jié)、抗肝纖維化、抗谷光甘肽(GSH)排空作用、抗腫瘤、降血脂

3、等藥理學(xué)效應(yīng)，但其對(duì)肝細(xì)胞脹亡影響方面的研究目前較少。 目的:通過(guò)D-氨基半乳糖(D-galactosamine，D-GalN)誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷，研究SIL在急性肝損傷中對(duì)肝細(xì)胞脹亡的影響，拓寬對(duì)SIL，保肝機(jī)制的研究，期望為各種肝病的診療提供更多新的思路與方法。 方法:60只SD大鼠隨機(jī)分為3組：對(duì)照組(n=12)、模型組(n=24)、SIL，干預(yù)組(n=24)，采用D-GalN腹腔注射誘導(dǎo)急性肝損傷模型。分別于致傷

4、后4h、8h、12h、16h、20h、24h取大鼠血清，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，水平；光鏡下觀察大鼠肝臟病理學(xué)改變；透射電鏡(TEM)下觀察肝組織超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞脹亡(oncosis)，計(jì)算脹亡指數(shù)(oncosisindex,OI)；免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)肝組織核因子-кB(NF-кB)的表達(dá)，半定量逆轉(zhuǎn)錄聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)肝組織中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)mRN

5、A的表達(dá)。 結(jié)果: 1.血清ALT、AST水平：注射D-GalN4h后，模型組大鼠血清ALT、AST較對(duì)照組明顯升高，兩者有顯著差異(P＜0.05)，后隨時(shí)相改變，ALT、AST水平逐漸上升，20h后達(dá)到高峰(ALT，1544.5±336.62；AST，2341.25±433.01)。SIL組與對(duì)照組各時(shí)相平行比較，均有不同程度增高，但較模型組明顯降低(P＜0.05)。 2.組織病理學(xué)特征及OI比值的檢測(cè)：病理切

6、片發(fā)現(xiàn)對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)清晰、小葉完整，細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)漿細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)紊亂，界板消失，細(xì)胞腫脹，胞漿空泡化，氣球樣變，胞膜破裂，胞漿外溢，有壞死及炎性浸潤(rùn)，隨時(shí)相延長(zhǎng)，病變加重；SIL干預(yù)組大鼠肝組織病理變化與模型組相似，但損傷程度較模型組減輕。透射電鏡下，正常肝細(xì)胞核膜結(jié)構(gòu)清晰、完整，核內(nèi)常染色質(zhì)多，異染色質(zhì)少，位于核周，其粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，層狀排列，線粒體數(shù)量較多，結(jié)構(gòu)完整，嵴豐富，基質(zhì)均勻；模型組

7、在致傷4h后即出現(xiàn)大量的細(xì)胞脹亡樣改變，表現(xiàn)為細(xì)胞體積增大、腫脹，胞膜局部向外膨隆，胞膜完整性被破壞，胞質(zhì)空泡化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，嵴腫脹，染色質(zhì)分散或凝集成塊，分布在核仁周?chē)蚝四は?。SIL干預(yù)組各時(shí)相OI值較模型組明顯降低(P＜0.05)。 3.肝組織NF-кB的表達(dá)：對(duì)照組肝細(xì)胞很少表達(dá)NF-Bк，或僅少量表達(dá)于細(xì)胞漿內(nèi)；模型組致傷后NF-кB表達(dá)明顯增強(qiáng)，由細(xì)胞漿轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，4h時(shí)達(dá)到高峰(38.36±4.75％)；SIL

8、干預(yù)組也有不同程度的陽(yáng)性表達(dá)，但較模型組明顯降低(P＜0.05)。 4.肝組織TNF-αmRNA的表達(dá)：正常對(duì)照組TNF-αmRNA表達(dá)痕量，模型組各時(shí)相點(diǎn)均有不同程度的表達(dá)，在致傷4h時(shí)出現(xiàn)高峰(0.965±0.17)，隨后逐漸下降。SIL干預(yù)組各時(shí)相TNF-αmRNA的表達(dá)均較模型組降低(P＜0.05)。 結(jié)論: (1)D-GalN可誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷，血清肝酶升高，肝組織中NF-кB、TNF-α表達(dá)增強(qiáng)，肝