銀杏葉提取物對(duì)D-氨基半乳糖-內(nèi)毒素誘導(dǎo)的小鼠急性肝衰竭FGL2及TNF-α表達(dá)的影響.pdf

1、背景及目的：
　　急性肝功能衰竭（ALF）病情進(jìn)展迅速，死亡率高，嚴(yán)重危害廣大勞動(dòng)人民的身體健康的。ALF目前臨床上無特異的治療方法，肝移植因?yàn)楦鞣N因素臨床上無法得到廣泛使用。因此，尋找適合我國國情的治療方法有著重大的意義。急性肝衰竭發(fā)病各種機(jī)制十分復(fù)雜。近些年由內(nèi)毒素誘導(dǎo)以 TNF-α為核心的炎癥反應(yīng)在ALF發(fā)生發(fā)展過程中的作用受到高度重視，TNF-α通過激活TNF受體激活多重凋亡途徑，加速肝細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致肝功能衰竭。相關(guān)文獻(xiàn)表

2、明ALF有明顯的微循環(huán)障礙，凝血酶的激活在ΑLF微循環(huán)障礙中發(fā)揮關(guān)鍵作用。FGL2凝血酶原酶是一種非經(jīng)典凝血途徑的促凝因子。研究發(fā)現(xiàn)在正常肝組織中未表達(dá)或少量表達(dá)，而在急性肝衰竭中FGL2呈中高度表達(dá)。因此減輕或阻斷FGL2及TNF-α表達(dá)可為急性肝衰竭的治療提供新的思路。
　　銀杏是我國特有的植物，EGB系銀杏葉經(jīng)過萃取的物質(zhì)目前臨床上主要用于治療心腦血管疾病，其具有改善微循環(huán)、清除自由基等作用。但對(duì)急性重型肝炎的作用尙未見報(bào)道

3、。本研究旨在通過構(gòu)建小鼠急性肝衰竭動(dòng)物模型，用不同濃度EGB進(jìn)行干預(yù)，觀察FGL2蛋白、腫瘤壞死因子、肝酶的表達(dá)水平，探討EGB對(duì)D-氨基半乳糖（D-GαlN）聯(lián)合脂多糖（LPS）構(gòu)建的小鼠急性肝衰的保護(hù)機(jī)制，同時(shí)為急性肝衰竭的治療提供新的思路和方法。
　　方法：
　　1.模型的建立及實(shí)驗(yàn)的分組：將昆明種小鼠(SPF級(jí))50只適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后，隨機(jī)分成空白、模型、銀杏葉提取物低、中、高劑量5組。
　　空白對(duì)照組10只，

4、造模前7天每日腹腔予以氯化鈉注射液注射。
　　模型組用D-GαIN350mg/kg和LPS30μg/kg同時(shí)腹腔注射構(gòu)建急性肝衰竭。
　　銀杏葉提取物干預(yù)各組EGB低劑量組50mg/kg、EGB中等劑量100mg/kg、EGB高劑量200mg/kg，每組各10只，每天予以腹腔內(nèi)注射EGB，共7天，于第7天上午予以D-GαlN350mg/kg和LPS30μg/kg同時(shí)腹腔注射，于注射后5小時(shí)后麻醉，開腹腹主動(dòng)脈采血、摘取肝臟，

5、供檢測(cè)使用。
　　2.檢測(cè)指標(biāo)：
　　2.1 肝組織病理學(xué)檢查：經(jīng)過包埋、切片等處理，后經(jīng)過HE染色經(jīng)過普通光學(xué)顯微鏡下觀察肝病理組織結(jié)構(gòu)變化情況.。
　　2.2 免疫組化測(cè)定肝組織FGL2蛋白表達(dá)。
　　2.3 TNF-α檢測(cè)采用ELISA法(試劑為上海羅氏生物制藥有限公司產(chǎn)品)。
　　2.4 血清學(xué)檢查：采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)ALT、AST。
　　結(jié)果：
　　1.模型組肝組織病理表現(xiàn)大片壞

6、死及炎癥細(xì)胞侵潤，免疫組化檢測(cè)肝組織FGL2蛋白高度表達(dá)，與空白組對(duì)其血ALT，AST，和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）升高差異顯著（P<0.01），急性肝衰竭模型構(gòu)建成功。
　　2.銀杏葉提取物能夠降低肝衰竭小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT），天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST），以及下調(diào)炎性因子中的腫瘤壞死因子-α（TNF-α）（P<0.01）。
　　3.病理學(xué)分析表明銀杏葉提取物能夠改善急性肝衰竭時(shí)肝組織壞死程度以及肝組織FGL2蛋白