308nm準分子激光對角質形成細胞影響的研究.pdf

1、背景：白癜風是一種原發(fā)性的、局限性或泛發(fā)性的皮膚色素脫失癥。據(jù)估計，人群中至少有1-2％人患白癜風。組織病理發(fā)現(xiàn)：黑素細胞部分或完全缺失，表皮基底層、真皮淺層T淋巴細胞浸潤。黑素細胞消失的潛在機制尚不清楚，有3種可能機制誘導白癜風的發(fā)生：自身免疫、神經(jīng)體液因素、自身細胞毒性。 由于白癜風發(fā)病機制不明，因此其治療效果不能使人滿意，目前的治療包括：局部用皮質類故醇激素、光線療法(NB-UVB，UVB，UVA)、光化學療法(UVB+補

2、骨脂素)、黑素細胞移植及近兩年出現(xiàn)的308nm準分子激光。據(jù)文獻報道，不管采用何種治療方法，白癜風患者皮損區(qū)色素恢復最主要的原因是毛囊乳頭處的黑素細胞移行到表皮內增殖分化，合成黑素，并轉運其至周圍的角質形成細胞。 308nm準分子激光屬于UVB紫外光(波長位于308nm±1nm)，被推測具有和UVA、UVB相似的生物學效應和臨床效果。308nm準分子激光在臨床上一經(jīng)用于白癜風的治療，就顯示其療效好、見效快的優(yōu)點。進兩年來已有多個

3、國家關于308-nm準分子在治療白癜風有效性、安全性的臨床研究報道。 308nm準分子激光治療機制尚不明確，推測可能有以下幾個方面：(1)刺激黑素細胞增生，促進黑素生成。(2)誘導皮損處病理性T淋巴細胞凋亡。因此，本課題根據(jù)以上這兩點推測分別進行探討。 1.308nm準分子激光對角質形成細胞分泌細胞因子的影響 研究依據(jù)：①既往研究表明中波紫外線(UVB)可誘導角質形成細胞(Humankeratinocyte，HK

4、C)分泌多種細胞因子，如干細胞生長因子(SCF)、成纖維細胞生長因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)、神經(jīng)生長因子(nervegrowthfactor，NGF)、內皮素(Endothelin-1，ET)、集落細胞生長因子(granulocyte-macrophagecolony-stimulating，GM-CSF)等，而這些細胞因子能產(chǎn)生某些生物學效應，如誘導黑素細胞移行、增殖、分化及促進黑素合成。

5、②308nm準分子激光的照射能量主要集中于表皮，只有大約20％的射線能到達真皮，即大部分能量集中于表皮。 基于以上兩點，因此提出假設：308nm準分子激光刺激角質形成細胞(KC)合成分泌細胞因子(SCF、GM-CSF、bFGF)，而這些角質形成細胞源性的細胞因子(部分KC源性的細胞因子已被證實)刺激無色素毛囊黑素細胞的移行、增殖、分化和黑素形成?；谶@一假設，本課題擬研究308nm準分子對角質形成細胞的作用。 目的：探討

6、308nm準分子激光對角質形成細胞(HKC)增殖及分泌細胞因子的影響。 方法：用CCK-8法檢測不同劑量308nm準分子激光照射人角質形成細胞(HKC)后12及24小時對細胞增殖的影響；不同劑量的308nm準分子激光照射HKC后12及24小時ELISA檢測角質形成細胞培養(yǎng)上清液中的干細胞生長因子(SCF)、集落細胞生長因子(GM-CSF)、成纖維細胞生長因子(bFGF)的濃度變化。 結果：角質形成細胞活力與照射劑量呈負相

7、關，不同劑量照射對角質形成細胞的活力影響差異有顯著性意義(F=30.672，P=0.000)，3個不同時間點間差異有顯著性意義(F=206.134，P=0.000)。不同照射劑量對角質形成細胞分泌SCF的影響差異有顯著性意義(P=0.014，F(xiàn)=6.033)，5個不同時間點間差異無顯著性(F=0.966，P=0.054)；不同照射劑量對角質形成細胞分泌GM-CSF的影響差異無顯著性意義(P=0.225，F(xiàn)=2.249)。5個不同時間點間

8、差異無顯著性(F=7.294，P=0.052)；不同照射劑量對角質形成細胞分泌bFGF的影響差異有顯著性意義(P=0.018，F(xiàn)=11.889)，5個不同時間點間差異無顯著性(F=49.105，P=0.001)。 2.308nm準分子激光誘導T淋巴細胞凋亡的作用研究 研究依據(jù)：①既往研究發(fā)現(xiàn)中波紫外線(UVB)能誘導人T淋巴細胞調亡。②T淋巴細胞是308nm準分子激光治療的靶細胞。③局部轉移生長因子(TGF-β1)是一種

9、表皮細胞增殖的負調節(jié)TGF-β1能誘導多種細胞發(fā)生凋亡。UVB照射后，TGF-β1水平升高，TGF-β1具有免疫調節(jié)作用，提示UVB誘導局部TGF-β1水平升高，從而抑制了局部免疫和炎癥反應，促進局部色素恢復。 目的：探討308nm準分子激光對T淋巴細胞的直接和間接誘導凋亡作用及轉化生長因子β1(TGF-β1)在誘導T淋巴細胞凋亡中的作用。 方法：ELISA檢測308nm準分子激光照射KC前及照射后12、24及48hHK

10、C分泌TGF-β1的濃度變化；308nm準分子激光照射體外分離的活動期白癜風患者外周血T淋巴細胞，流式細胞儀檢測照射后48小時T淋巴細胞凋亡情況；建立transwell細胞共培養(yǎng)系統(tǒng)(角質形成細胞位于上室，T淋巴細胞位于下室)，照射前加入不同濃度的抗TGF-β1抗體(25、250、2500pg/ml)，308nm準分子激光照射transwell上室，照射后48小時檢測T淋巴細胞凋亡。 結果：流式細胞術結果顯示：308nm準分子激

11、光可直接誘導T淋巴細胞凋亡；308nm準分子激光照射trariswell上室可間接誘導T淋巴細胞凋亡。308nm準分子激光誘導角質形成細胞分泌TGF-β1的增加呈劑量依賴性；照射前加入抗TGF-β1抗體，可抑制準分子激光的誘導凋亡作用。 3.結論： ①308nm通過照射表皮的角質形成細胞，使角質形成細胞分泌SCF、GM-CSF、bFGF等具有促使黑素細胞增殖、分化及黑素合成的細胞因子，通過以上的細胞因子間接作用于黑素細胞