臍血間質(zhì)干細(xì)胞梗死心肌移植研究.pdf

1、目的 體外提取,培養(yǎng)擴(kuò)增臍血間質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)5-氮雜胞嘧啶核苷(5-azacytidine,5-aza)誘導(dǎo)分化為肌源性干細(xì)胞,以DAPI(4'6-diamidino-2-plenylindone,DAPI)標(biāo)記后,移植入建立的犬急性心肌梗死心肌內(nèi),研究臍血間質(zhì)干細(xì)胞梗死心肌移植的心肌細(xì)胞再生、細(xì)胞因子分泌、促梗死區(qū)微血管形成,心肌基本結(jié)構(gòu)保護(hù)作用.方法選取孕齡為50天左右的妊娠雜種犬,在無菌條件下采集犬臍帶血,以淋巴細(xì)胞分離液提取單個(gè)核

2、細(xì)胞,接種于IMDM培養(yǎng)基,貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng).選擇生長(zhǎng)至50％~60％融合的臍血貼壁細(xì)胞,采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)臍血貼壁細(xì)胞表面抗原表達(dá);培養(yǎng)至第四代的臍血間質(zhì)干細(xì)胞作為肌源性誘導(dǎo)分化的對(duì)象,以濃度為10umol/L的5-aza作為誘導(dǎo)分化劑作用24小時(shí),鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)改變,檢測(cè)經(jīng)5-aza處理后的臍血間質(zhì)干細(xì)胞肌節(jié)性肌動(dòng)蛋白(a-Sarcomeric-actin)、結(jié)蛋白(desmin)肌源性特異性標(biāo)記物的表達(dá),以成年雜種

3、犬的正常心肌組織作為其陽(yáng)性對(duì)照.結(jié)論 臍血間質(zhì)干細(xì)胞是一類不同于造血干細(xì)胞的處于原始未分化狀態(tài)的干/祖細(xì)胞,在誘導(dǎo)分化劑的作用下可向肌源性細(xì)胞定向分化.經(jīng)梗死心肌移植后具有心肌再生作用.同時(shí),移植的干細(xì)胞在梗死心肌內(nèi)仍保留其細(xì)胞生長(zhǎng)因子分泌功能,在梗死心肌內(nèi)分泌細(xì)胞生長(zhǎng)因子IGF-1、VEGF,且該分泌功能對(duì)梗死心肌起到積極作用,可促使梗死區(qū)恢復(fù)殘存心肌細(xì)胞desmin分布,同時(shí)促進(jìn)梗死心肌內(nèi)微血管再生,從而有望改善缺血心肌的微循環(huán).該