臍血間質(zhì)干細胞梗死心肌移植研究.pdf

1、目的 體外提取,培養(yǎng)擴增臍血間質(zhì)干細胞,經(jīng)5-氮雜胞嘧啶核苷(5-azacytidine,5-aza)誘導分化為肌源性干細胞,以DAPI(4'6-diamidino-2-plenylindone,DAPI)標記后,移植入建立的犬急性心肌梗死心肌內(nèi),研究臍血間質(zhì)干細胞梗死心肌移植的心肌細胞再生、細胞因子分泌、促梗死區(qū)微血管形成,心肌基本結(jié)構(gòu)保護作用.方法選取孕齡為50天左右的妊娠雜種犬,在無菌條件下采集犬臍帶血,以淋巴細胞分離液提取單個核

2、細胞,接種于IMDM培養(yǎng)基,貼壁細胞傳代培養(yǎng).選擇生長至50％~60％融合的臍血貼壁細胞,采用免疫組織化學法檢測臍血貼壁細胞表面抗原表達;培養(yǎng)至第四代的臍血間質(zhì)干細胞作為肌源性誘導分化的對象,以濃度為10umol/L的5-aza作為誘導分化劑作用24小時,鏡下觀察細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的動態(tài)改變,檢測經(jīng)5-aza處理后的臍血間質(zhì)干細胞肌節(jié)性肌動蛋白(a-Sarcomeric-actin)、結(jié)蛋白(desmin)肌源性特異性標記物的表達,以成年雜種

3、犬的正常心肌組織作為其陽性對照.結(jié)論 臍血間質(zhì)干細胞是一類不同于造血干細胞的處于原始未分化狀態(tài)的干/祖細胞,在誘導分化劑的作用下可向肌源性細胞定向分化.經(jīng)梗死心肌移植后具有心肌再生作用.同時,移植的干細胞在梗死心肌內(nèi)仍保留其細胞生長因子分泌功能,在梗死心肌內(nèi)分泌細胞生長因子IGF-1、VEGF,且該分泌功能對梗死心肌起到積極作用,可促使梗死區(qū)恢復殘存心肌細胞desmin分布,同時促進梗死心肌內(nèi)微血管再生,從而有望改善缺血心肌的微循環(huán).該