miRNA21在糖尿病大鼠腎組織中表達變化的研究.pdf

1、目的: 動態(tài)觀察miRNA21在糖尿病大鼠腎組織及高糖環(huán)境下腎小管上皮細胞中的表達變化，探討miRNA21在糖尿病腎病發(fā)病過程中的作用及其作用機制，為糖尿病腎病的防治尋求新的靶點。
　　方法: 雄性 SD大鼠隨機分為正常對照組（NC）、糖尿病組（DM），糖尿病胰島素治療組(INS)。采用鏈脲佐菌素（55mg/kg）尾靜脈注射復制1型糖尿病大鼠模型，NC組和DM組成模后分別于8周（8w）、16周（16w）、24周（24w）處死；成模

2、13周起，INS組大鼠采用胰島素個體化治療，以血糖控制在4-7mmol/L，尿糖陰性為準，于24周時處死大鼠。體外培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細胞(NRK52E)，隨機分為:正常糖對照組和高糖組。生化方法測血糖、24h尿蛋白；HE染色光鏡下觀察胰腺組織形態(tài)結構變化，HE、PAS、Masson染色光鏡下觀察腎組織形態(tài)結構變化；免疫組化觀察大鼠腎臟 TGF-β1、FN、Col-1、Col-3、E-cadherin、α-SMA蛋白的表達情況；Weste

3、rn blotting檢測大鼠腎組織 E-cadherin、α-SMA蛋白的表達變化；Realtime-PCR檢測大鼠腎組織及高糖環(huán)境下腎小管上皮細胞miRNA21的表達情況。
　　結果: （1）與NC組大鼠相比，各組DM大鼠血糖和24h尿蛋白量均顯著升高(P<0.05)；與DM組比較，INS組上述指標則明顯降低(P<0.05)，且腎纖維化病變改善。（2）免疫組化結果顯示，與NC組大鼠相比較，DM大鼠腎組織TGF-β1、FN、Co

4、l-1、Col-3和α-SMA表達明顯增加(P<0.05)，E-cadherin表達減少(P<0.05)；與DM組相比，INS組 TGF-β1、FN、Col-1、Col-3和α-SMA的表達明顯減少(P<0.05)，E-cadherin的表達顯著增多(P<0.05)。（3）Western blotting結果顯示，與NC組大鼠相比，DM大鼠腎組織 E-cadherin的表達減少（P<0.05）、α-SMA表達增加（P<0.05）；與DM

5、組相比，INS組大鼠腎組織E-cadherin的表達增加（P<0.05）、α-SMA表達減少（P<0.05)。（4）Realtime-PCR結果顯示 DM大鼠腎組織miRNA21 mRNA的表達較NC組大鼠增多（P<0.05），而INS組miRNA21 mRNA表達較DM組顯著減少（P<0.05)；經(jīng)高糖處理后腎小管上皮細胞miRNA21 mRNA較正常糖對照組表達增多（P<0.05)。
　　結論: (1) miRNA21 mRN